基于猪miR-17-92簇制备抗CSFV/PEDV基因修饰猪的研究

发布时间：2021-05-10 22:55

　　由于编辑效率高且构建快速,CRISPR/Cas9技术极大地推动了外源基因的定点整合研究。外源基因的有效敲入,需要安全位点允许其整合和有效表达,并且不影响细胞或生物体内的内在基因功能。目前,猪基因组中用于外源基因整合的常用的两个位点:Rosa26位点和H11位点。然而,用于转基因研究和制备基因编辑动物的安全整合位点还远远不够。因此,这就需要我们在猪基因组中寻找更多适合外源基因整合的位点。本研究主要以猪miR-17-92基因簇为研究对象,利用CRISPR/Cas9介导的同源重组途径成功验证了在猪miR-17-92簇整合和表达外源基因以及制备基因修饰猪的潜力。首先,利用CRISPR/Cas9技术成功构建了EGFP报告细胞系。通过CRISPR/Cas9介导的定点整合技术,我们成功地将特异性抑制EGFP基因的shRNA精确整合至miR-17-92的3’UTR。在猪miR-17-92控制下插入的shRNA基因正常转录并有效抑制EGFP基因的表达。这表明猪miR-17-92允许外源基因整合和有效表达。在上述基础上,我们通过筛选获得了抗猪瘟病毒shRNA定点整合的猪胎儿成纤维细胞系。我们发现抗猪瘟病毒... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
abstract
英文缩写词表
前言
第一篇 文献综述
    第1章 基因编辑技术的研究进展
        1.1 ZFN技术
        1.2 TALEN技术
        1.3 CRISPR/Cas9技术
        1.4 基因修饰猪的应用
    第2章 miR-17-92簇的研究进展
        2.1 miR-17-92簇的结构和表达
        2.2 miR-17-92簇的调控
        2.3 miR-17-92簇的功能
        2.4 miR-17-92簇的前景
第二篇 研究内容
    第1章 猪miR-17-92簇整合外源基因的可行性研究
        1.1 材料
        1.2 方法
        1.3 结果
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第2章 猪miR-17-92簇定点整合抗CSFV shRNA基因的研究
        2.1 材料
        2.2 方法
        2.3 结果
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第3章 基于猪miR-17-92簇制备抗PEDV shRNA基因修饰猪
        3.1 材料
        3.2 方法
        3.3 结果
        3.4 讨论
        3.5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介及其在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3180211