Omi/HtrA2基因过表达腺病毒载体的构建与鉴定

发布时间：2021-06-01 00:35

　　目的:构建在哺乳动物细胞中表达的-Omi/HtrA2基因融合表达载体,为后续研究Omi/HtrA2基因过表达对结肠癌细胞HT29的影响奠定基础。方法:PCR扩增HtrA2基因编码框,用KpnI和BamHI将TS-HtrA2及目的载体pEC3.1（+）两步法双酶切,然后进行连接转化,构建基因重组载体radE5-HtrA2,包装重组腺病毒,RT-PCR检测重组腺病毒基因mRNA的表达并提取蛋白进行Westernblot检测。结果:重组真核表达载体radE5-HtrA2经限制性内切酶分析,双酶切之后的条带与理论值相符,测序结果未见碱基变异,提取转染后细胞总蛋白进行Westernblot检测,可测到目标条带。结论:成功构建了基因重组载体radE5-HtrA2,并能在结肠癌细胞HT29中正常表达,为后续研究Omi/HtrA2基因功能奠定基础。 

【文章来源】：科技视界. 2020,(16)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

HtrA2 RT-PCR结果

Western显影

图4 双酶切radE5-HtrA2电泳图谱

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3209294