人诱导多潜能干细胞向心肌细胞分化的实验研究

发布时间：2021-06-15 15:22

　　目的探究通过阶段性调控经典Wnt信号通路促使人诱导多潜能干细胞向心肌细胞分化。方法采用阶段性激活或抑制Wnt信号通路的方案使人尿路上皮细胞来源的多潜能干细胞（U1细胞系）定向分化为心肌细胞,在分化第14天,采用流式细胞术检测U1细胞向心肌细胞分化的效率,利用免疫细胞化学检测心肌细胞肌钙蛋白表达,通过激光扫描共聚焦荧光显微镜检测人诱导多潜能干细胞来源的心肌细胞（hiPSC-CMs）的Ca²⁺活动,利用全细胞膜片钳技术记录hiPSC-CMs的电生理特性。结果 U1细胞系向hiPSC-CMs分化的效率为（88±3）%;全细胞膜片钳技术记录的动作电位特征显示hiPSC-CMs可分为心室肌样细胞、心房肌样细胞和窦房结样细胞,其中主要是心室肌样细胞。窦房结样细胞的比例、动作电位时程、动作电位幅度及最大去极化速率均明显小于心室肌样细胞和心房肌样细胞。结论阶段性调控Wnt信号通路能促使hiPSCs定向分化为hiPSC-CMs,并且hiPSC-CMs具有哺乳动物心肌细胞相似的电生理特征。 

【文章来源】：心血管病学进展. 2020,41(07)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

显微镜下观察hi PSC-CMs以及流式检测分化效率

免疫荧光:hi PSC-CMs表达c Tn T

Ca2+作为一种普遍的第二信使参与了各种细胞的病理生理过程，心肌细胞内Ca2+浓度节律性改变是心脏收缩功能的基础。心肌细胞的兴奋收缩偶联过程均伴随着细胞内Ca2+浓度的改变，这种浓度变化的时间及空间效应形成了心肌细胞内的钙瞬变。本实验用Ca2+指示剂Fluo4-AM转染hi PSC-CMs，并用激光扫描共聚焦荧光显微镜观察，用Leica Application Suite X软件进行图像采集。结果显示，hi PSC-CMs展现出自发的节律性Ca2+活动(图4)。2.3 hi PSC-CMs的动作电位特征

【参考文献】：
期刊论文
[1]干细胞治疗心力衰竭临床研究进展[J]. 梁小婷,范慧敏,刘中民.  心血管病学进展. 2018(03)



本文编号：3231306