基于氨基酸代谢分析的免疫细胞无血清培养基的研制

发布时间：2021-06-21 20:40

　　氨基酸是无血清培养基中的重要组成部分,其种类和浓度配比对免疫细胞增殖和活化具有重要意义。为此,本文以自然杀伤细胞（Natural killer cells,NK-92）为对象,探究NK-92细胞体外扩增与氨基酸代谢之间的关系,从氨基酸的角度对无血清培养基进行理性设计与优化。首先在自主设计的成分简单且明确的无血清培养基SFM-MIN中分析了培养过程中NK-92细胞的氨基酸代谢特性,根据氨基酸的比消耗速率将谷氨酰胺、丝氨酸、亮氨酸和精氨酸初步确定为影响NK-92细胞体外扩增的关键氨基酸,并通过正交实验确定4种氨基酸的最适浓度分别为13.00、0.40、1.15和0.70 mmol/l。将SFM-MIN中上述4种氨基酸的浓度调至最适水平后将其命名为SFM-OPT,以商业化无血清培养基为对照评价SFM-OPT对NK-92细胞的扩增效果。结果发现体外培养10 d后,SFM-OPT中的总细胞扩增倍数以及培养物中的CD3-CD56+细胞比例分别为164.06±35.94倍和（88.70±1.47）%,显著高于对照组中的 54.25±12.14 倍和（69.83±3.11）%（p<0.05）;而... 

【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．３氨基酸在主要代谢途径中的位置节点％??（绿色线条表示中心碳代谢，英文字母表示不同的氨基酸）??Ｆｉｇ．?１．３?Ｐｏｓｉｔｉｏｎ?ｎｏｄｅ?ｏｆ?ａｍｉｎｏ?ａｃｉｄｓ?ｉｎ?ｍａｊｏｒ?ｍｅｔａｂｏｌｉｃ?ｐａｔｈｗａｙｓｆ３８］??

第２８页?华东理工大学硕士学位论文??（６９．８３±３．１１）％?（ｐ?＜０．０５Ｘ图３．６Ｃ）。进一步按照２．３．５所述方法将扩增１０?ｄ后的ＮＫ－９２??细胞与癌细胞Ｋ５６２共培养评价其杀伤活性，在ＳＦＭ－ＯＰＴ培养的ＮＫ－９２细胞的杀伤活??性为（６５．３０±５．９６）?％，与对照组中培养的ＮＫ－９２细胞的杀伤活性（５９．４０±２．６５）?°／４目当??（图３．６Ｄ）。可见，优化了氨基酸浓度的ＳＦＭ－ＯＰＴ可以更有效的促进ＮＫ－９２细胞的体??外扩增且不影响其功能。??Ａ?Ｂ??□?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＭＭ?ＳＦＭ－ＯＰＴ??＾?１００?－？?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＳＦＭ－ＯＰＴ?圣?‘??荽?Ｔ?＊?＊?＊?＾?２００－?Ｔ??ｓ?？?１?ｚ??２?ｆ?－．?．?￡ｉｓ〇－?Ｉ??＊３?１?ｉ?１００－?Ａ，?Ｉ??！－?１１＿?ｒ；?ｎｉ?ｔｉ??Ｐ?０?２￣￣４￣￣６８￣￣＾０?２?４?６?８?！０??Ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｔｉｔｎｃ（ｄ）?Ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｔｉｍｅ（（ｌ）??Ｃ?Ｄ??＊??１００１?Ｉ?８０－??Ｕ！：?＿?Ｉ??」２］?＿?＿??ｃ—ｉ?ｓｆｍ〇ｐｔ?ｃＺｚｒ?ｓＳ〇ｐｔ—??图３．６?ＮＫ－９２细胞在ＳＦＭ－ＯＰＴ中的效果验证（ｎ＝３）??Ａ：细胞活性；Ｂ：总细胞扩增倍数；??Ｃ：?ＣＤ３＿ＣＤ５６＋细胞比例；Ｄ：?ＮＫ－９２细胞对Ｋ５６细胞的杀伤活性??Ｆｉｇ．?３．６?Ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＮＫ－９２?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ＳＦＭ－ＯＰＴ?（ｎ?＝?３）；?Ｐ＜０．０５??Ａ：

华东理工大学硕士学位论文?第３１页??ＣＤ３－ＣＤ５６＋细胞比例并提高了?ＮＫ－９２细胞在培养后期的比生长速率，促进了?ＮＫ－９２细??胞的扩增。??漏眶：＿麵??奪：??图４．１?ＮＫ－９２细胞在不同谷氨酰胺浓度下的细胞形态??（Ａ）２．００?ｍｍｏｌ／ｌ；?（Ｂ）?８．００?ｍｍｏｌ／１；?（Ｃ）?１０．５０?ｍｍｏｌ／１；??（Ｄ）?１３．００?ｍｍｏｌ／ｌ；（Ｅ）?１５．５０?ｍｍｏｌ／１；?（Ｆ）?２５．５０?ｍｍｏｌ／１；??Ｆｉｇ．?４．１?Ｔｈｅ?ｃｅｌｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ＮＫ－９２?ｃｅｌｌｓ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｇｌｕｔａｍｉｎｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ??（Ａ）２．００?ｍｍｏｌ／１；?（Ｂ）?８．００?ｍｍｏｌ／１；?（Ｃ）?１０．５０?ｍｍｏｌ／１；??（Ｄ）?１３．００?ｍｍｏｌ／ｌ；（Ｅ）?１５．５０?ｍｍｏｌ／１；?（Ｆ）?２５．５０?ｍｍｏｌ／１；??


本文编号：3241372