北极狐、貉、犬IFN-基因克隆及表达
发布时间：2021-06-22 12:52
干扰素（IFN）系统作为天然性免疫和适应性免疫反应的关键环节,是抵御病毒感染的第一道防线,尤其是Ⅰ型IFN一直是临床上用来治疗病毒感染的有效药物。因此,研制具有较高的抗病毒活性的IFN-,对开发基因工程抗病毒药物十分重要。本研究采用RT-PCR技术,从PHA诱导的北极狐、貉、犬外周血淋巴细胞中扩增IFN-基因,序列分析比较结果表明,3种犬科动物的IFN-基因序列大小一致,均为561 bp,编码186个氨基酸;核苷酸同源性达98.4%～100%,氨基酸序列同源性达97.3%～100%;与肉食类IFN-亚型相似,北极狐、貉和犬IFN-含5个N-糖基化位点;应用大肠杆菌表达貉IFN-成熟肽基因,获得19 kD的重组蛋白,该蛋白的成功表达为开发高效抗病毒药物奠定了研究基础。
【文章来源】：特产研究. 2020,42(01)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
貉IFN-同意义突变位点.表示同意义突变位点
18.414.41.蛋白分子量标准；2、4、5.狐、貉和犬IFN-；3.空载体对照；7、8、9.未诱导对照。1.Marker;2,4,5.Arcticfox,raccoondoganddogIFN-;3.Emptybodycontrol;7,8,9.Uninducedcontrol.图6北极狐、貉和犬IFN-SDS-PAGE电泳检测Fig.6DetectionofSDS-PAGEelectrophoresisinarcticfox,rac-coondoganddogIFN-123KD60.045.035.025.014.41.貉IFN-重组蛋白；2.犬IFN-重组蛋白；3.蛋白分子量标准。1.RaccoondogIFN-recombinantprotein;2.DogIFN-recombinantprotein;3.Marker.图7His-单抗Westernblot检测貉和犬IFN-重组蛋白的表达Fig.7IdentificationofrecombinantproteinbyWesternblottingwithHis-tagmonoclonalantibody3讨论本研究采用RT-PCR技术从PHA诱导的北极狐、貉、犬外周血淋巴细胞中扩增了IFN-基因，从序列分析比较结果得出，北极狐IFN-与犬IFN-基因同源性最高，达100%，而貉与犬和北极狐的IFN-差异明显，有9个核苷酸的变异，其中有5个同意义突变位点；预测的N-糖基化位点也有明显差异，这一结果也说明，北极狐和犬的IFN-基因进化关系更近一些，而貉较远。IFN-作为机体免疫中具有重要作用的细胞因子之一，也是机体免疫功能评判的重要指标之一，本研究构建了IFN-表达载体并成功表达了成熟肽蛋白，为开发IFN-兽用治疗制剂提供了理论基矗基因工程干扰素与其他型干扰素相比较，有着很多优点，例如污染小甚至没有污染、安全性高、成本低等[14]，从而使干扰素商品化，广泛应用于临床治疗与免疫，为新兽药的研发奠定基矗参考文献[1]IsaacsA,LindenmannJ.Virusinterference.I.Theinterferon[J].P
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬IFN-β的克隆及其序列分析[J]. 黄梦秋,嵇辛勤,段志强,李世静,阮涌,万彪,胡焱,邓珊珊,龙丹丹,田宇杰. 黑龙江畜牧兽医. 2019(07)
[2]干扰素β的研究现状[J]. 韩玉杰,王倩,张竞. 化学工程与装备. 2016(08)
[3]水貂β-干扰素基因的克隆、测序与遗传进化分析[J]. 张译元,张廷红,常维山. 中国兽药杂志. 2012(01)
[4]干扰素-β1b的高效表达、纯化及抗病毒活性研究[J]. 李武平,吕宏亮,段招军,张丽萍,刘永清,吴斌文,陈勇,张成海,衣作安,魏开坤,侯云德. 病毒学报. 2002(03)
本文编号：3242868
【文章来源】：特产研究. 2020,42(01)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
貉IFN-同意义突变位点.表示同意义突变位点
18.414.41.蛋白分子量标准；2、4、5.狐、貉和犬IFN-；3.空载体对照；7、8、9.未诱导对照。1.Marker;2,4,5.Arcticfox,raccoondoganddogIFN-;3.Emptybodycontrol;7,8,9.Uninducedcontrol.图6北极狐、貉和犬IFN-SDS-PAGE电泳检测Fig.6DetectionofSDS-PAGEelectrophoresisinarcticfox,rac-coondoganddogIFN-123KD60.045.035.025.014.41.貉IFN-重组蛋白；2.犬IFN-重组蛋白；3.蛋白分子量标准。1.RaccoondogIFN-recombinantprotein;2.DogIFN-recombinantprotein;3.Marker.图7His-单抗Westernblot检测貉和犬IFN-重组蛋白的表达Fig.7IdentificationofrecombinantproteinbyWesternblottingwithHis-tagmonoclonalantibody3讨论本研究采用RT-PCR技术从PHA诱导的北极狐、貉、犬外周血淋巴细胞中扩增了IFN-基因，从序列分析比较结果得出，北极狐IFN-与犬IFN-基因同源性最高，达100%，而貉与犬和北极狐的IFN-差异明显，有9个核苷酸的变异，其中有5个同意义突变位点；预测的N-糖基化位点也有明显差异，这一结果也说明，北极狐和犬的IFN-基因进化关系更近一些，而貉较远。IFN-作为机体免疫中具有重要作用的细胞因子之一，也是机体免疫功能评判的重要指标之一，本研究构建了IFN-表达载体并成功表达了成熟肽蛋白，为开发IFN-兽用治疗制剂提供了理论基矗基因工程干扰素与其他型干扰素相比较，有着很多优点，例如污染小甚至没有污染、安全性高、成本低等[14]，从而使干扰素商品化，广泛应用于临床治疗与免疫，为新兽药的研发奠定基矗参考文献[1]IsaacsA,LindenmannJ.Virusinterference.I.Theinterferon[J].P
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬IFN-β的克隆及其序列分析[J]. 黄梦秋,嵇辛勤,段志强,李世静,阮涌,万彪,胡焱,邓珊珊,龙丹丹,田宇杰. 黑龙江畜牧兽医. 2019(07)
[2]干扰素β的研究现状[J]. 韩玉杰,王倩,张竞. 化学工程与装备. 2016(08)
[3]水貂β-干扰素基因的克隆、测序与遗传进化分析[J]. 张译元,张廷红,常维山. 中国兽药杂志. 2012(01)
[4]干扰素-β1b的高效表达、纯化及抗病毒活性研究[J]. 李武平,吕宏亮,段招军,张丽萍,刘永清,吴斌文,陈勇,张成海,衣作安,魏开坤,侯云德. 病毒学报. 2002(03)
本文编号：3242868
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