利用诱变技术创制高多糖含量灵芝菌株的研究
发布时间：2021-06-24 12:19
灵芝是我国传统的名贵中药,其含有的活性成分主要是灵芝多糖与灵芝三萜类化合物。现在市面上存在大量的灵芝类保健品,添加了灵芝成分的化妆品、护肤品等,随着社会压力与人口老龄化的加剧,各个年龄段的人群对健康都日益重视。随着对灵芝的药理功效等的研究越来越深入透彻,以及人们对于药食同源等理念愈加广泛的接受,可以预见未来市场对于灵芝产品的需求也将会更加旺盛。因此科研与产业都急需要高品质的原材料原料用于产品的研发,然而由于近年来灵芝的育种技术缺乏创新,导致市场需要的高多糖含量的专用种质资源十分匮乏。所以本论文拟以高多糖的菌株为出发菌株,利用紫外和ARTP诱变技术,对出发菌株的原生质体进行诱变处理,以获得高多糖的诱变菌株。本论文的取得生物主要研究成果如下:（1）优化出优良出发菌株的筛选与原生质体制备条件对于出发菌株进行了原生质体的优化与原生质体活力的鉴定,得到原生质体最佳制备条件为菌丝体第8天,酶解时间为3h,酶解温度为31℃,收集原生质体离心力为1811g,该条件下制备的原生质体浓度达到1.3×108,且经过染色鉴定原生质体活力证实活力良好,在普通再生平板上的原生质体的再生率可达...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
0株供试菌株的多糖含量
上海海洋大学硕士学位论文12图2-2培养时间对原生质体再生率的影响Fig.2-2Effectofculturetimeonprotoplastregenerationrate2.3.3酶解时间对原生质体再生率的影响通过图2-3可以看出，在显微镜下观察，当菌丝体酶解时间为2.5h时，菌丝体还没有完全被酶解，残留的菌丝体清晰可见；当酶解时间为3h时，菌丝体酶解比较充分，原生质体大小一致；当酶解时间为3.5h时，原生质体的大小出现差异，肉眼可见原生质体聚集；当酶解时间为4h时，原生质体悬液开始出现浑浊现象。结合图2-4可知，当酶解时间为3h时，G157菌株的原生质体再生率最高，为2.97‰，所以选取酶解时间3h为G157菌株的最佳酶解时间。
上海海洋大学硕士学位论文13图2-3显微镜观察不同酶解时间下的原生质体（×100）Fig.2-3Microscopeobservationofprotoplastsatdifferentenzymolysistimes（×100）图2-4不同酶解时间、转速对原生质体再生率的影响Fig.2-4Effectofdifferentenzymolysistime、rotationalspeedsonprotoplastregenerationrate2.3.4离心力对原生质体再生率的影响由图2-4可以看出当转速为3000rpm/min（离心力为1811g）时，原生质体的再生率最高，为4‰，此时制备的原生质体浓度达到2.09×108。结合菌丝体培养时间与酶解时间可知，当菌丝体培养时间为7d-10d，酶解时间3h，离心收集原生质体的离心力为1811g时，原生质体的再生率最佳。2.3.5正交试验的结果根据单因素分析，确定酶解时间2.5h、3h、3.5h，转速2500rpm(1258g)、3000rpm(1811g)、3500rpm(2465g)，生长时间为6、8、10天为三因素三水平的正交试验。表2-1田口正交试验设计和结果Table2-1DesignandResultsofTaguchiOrthogonalExperiment酶解时间(h)转速(rpm/rcf)天数(d)再生率(‰)2.5250060.36±0.0122.5300081.24±0.0212.53500101.14±0.0153250082.78±0.01433000103.12±0.0233350062.76±0.0183.52500101.85±0.0163.5300062.78±0.0203.5350083.04±0.019
【参考文献】：
期刊论文
[1]灵芝新品种康定灵芝选育研究[J]. 唐明先,陈杭,罗孝贵,何晓兰,羊玉蓉,马薇,戴旭光,降初拉尔布. 中国食用菌. 2018(05)
[2]紫外-ARTP复合诱变选育达巴万星前体高产菌株[J]. 王小连,郄丽萍,马婕,代明伟,邓佩佩. 化学与生物工程. 2017(12)
[3]采用近红外漫反射光谱进行牛樟芝菌丝体组分检测的研究[J]. 初秋博,赵毅,刘燕隔,张元竹,周毓麟. 药物分析杂志. 2017(10)
[4]紫外照射对灵芝菌丝体多糖的影响[J]. 张帅,黄嘉玲,林怡丽,程昊. 广东农业科学. 2017(08)
[5]常压室温等离子体（ARTP）诱变技术选育柱状田头菇（茶树菇）优良菌株研究初探[J]. 王谦,黄媛媛,宋长林. 菌物学报. 2017(06)
[6]基于近红外漫反射光谱的云芝提取物多糖含量快速检测研究[J]. 张钰莹,王星丽,涂红艳,瞿亮,邵平. 核农学报. 2017(04)
[7]基于ARTP诱变和高通量筛选的绿针假单胞菌GP72育种方法[J]. 江耀祖,彭华松,张雪洪. 微生物学通报. 2017(10)
[8]敞开式离子化质谱技术在中草药研究中的应用[J]. 黄鑫,刘文龙,张勇,刘淑莹. 质谱学报. 2017(01)
[9]灵芝菌丝体及发酵液中三萜化合物的研究进展[J]. 张容容,陈慧,刘高强,王晓玲. 食用菌学报. 2016(03)
[10]钙离子和水杨酸诱导灵芝多糖和三萜的合成[J]. 叶丽云,林强,刘梅,吴小平. 菌物学报. 2017(02)
博士论文
[1]等离子体诱变灵芝及其药用成分的红外光谱分析[D]. 马玉涵.中国科学技术大学 2018
[2]基于多尺度创新原理的工业微生物高通量筛选平台构建及应用研究[D]. 谭俊.华东理工大学 2013
硕士论文
[1]灵芝多糖合成途径关键酶基因过表达的研究[D]. 李瑞勤.江南大学 2017
[2]灵芝菌丝体培养中多糖组分的变化与相关酶活性分析[D]. 王琼.江南大学 2013
[3]草菇60Co诱变育种研究[D]. 林瑞虾.福建农林大学 2011
本文编号：3247085
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
0株供试菌株的多糖含量
上海海洋大学硕士学位论文12图2-2培养时间对原生质体再生率的影响Fig.2-2Effectofculturetimeonprotoplastregenerationrate2.3.3酶解时间对原生质体再生率的影响通过图2-3可以看出，在显微镜下观察，当菌丝体酶解时间为2.5h时，菌丝体还没有完全被酶解，残留的菌丝体清晰可见；当酶解时间为3h时，菌丝体酶解比较充分，原生质体大小一致；当酶解时间为3.5h时，原生质体的大小出现差异，肉眼可见原生质体聚集；当酶解时间为4h时，原生质体悬液开始出现浑浊现象。结合图2-4可知，当酶解时间为3h时，G157菌株的原生质体再生率最高，为2.97‰，所以选取酶解时间3h为G157菌株的最佳酶解时间。
上海海洋大学硕士学位论文13图2-3显微镜观察不同酶解时间下的原生质体（×100）Fig.2-3Microscopeobservationofprotoplastsatdifferentenzymolysistimes（×100）图2-4不同酶解时间、转速对原生质体再生率的影响Fig.2-4Effectofdifferentenzymolysistime、rotationalspeedsonprotoplastregenerationrate2.3.4离心力对原生质体再生率的影响由图2-4可以看出当转速为3000rpm/min（离心力为1811g）时，原生质体的再生率最高，为4‰，此时制备的原生质体浓度达到2.09×108。结合菌丝体培养时间与酶解时间可知，当菌丝体培养时间为7d-10d，酶解时间3h，离心收集原生质体的离心力为1811g时，原生质体的再生率最佳。2.3.5正交试验的结果根据单因素分析，确定酶解时间2.5h、3h、3.5h，转速2500rpm(1258g)、3000rpm(1811g)、3500rpm(2465g)，生长时间为6、8、10天为三因素三水平的正交试验。表2-1田口正交试验设计和结果Table2-1DesignandResultsofTaguchiOrthogonalExperiment酶解时间(h)转速(rpm/rcf)天数(d)再生率(‰)2.5250060.36±0.0122.5300081.24±0.0212.53500101.14±0.0153250082.78±0.01433000103.12±0.0233350062.76±0.0183.52500101.85±0.0163.5300062.78±0.0203.5350083.04±0.019
【参考文献】：
期刊论文
[1]灵芝新品种康定灵芝选育研究[J]. 唐明先,陈杭,罗孝贵,何晓兰,羊玉蓉,马薇,戴旭光,降初拉尔布. 中国食用菌. 2018(05)
[2]紫外-ARTP复合诱变选育达巴万星前体高产菌株[J]. 王小连,郄丽萍,马婕,代明伟,邓佩佩. 化学与生物工程. 2017(12)
[3]采用近红外漫反射光谱进行牛樟芝菌丝体组分检测的研究[J]. 初秋博,赵毅,刘燕隔,张元竹,周毓麟. 药物分析杂志. 2017(10)
[4]紫外照射对灵芝菌丝体多糖的影响[J]. 张帅,黄嘉玲,林怡丽,程昊. 广东农业科学. 2017(08)
[5]常压室温等离子体（ARTP）诱变技术选育柱状田头菇（茶树菇）优良菌株研究初探[J]. 王谦,黄媛媛,宋长林. 菌物学报. 2017(06)
[6]基于近红外漫反射光谱的云芝提取物多糖含量快速检测研究[J]. 张钰莹,王星丽,涂红艳,瞿亮,邵平. 核农学报. 2017(04)
[7]基于ARTP诱变和高通量筛选的绿针假单胞菌GP72育种方法[J]. 江耀祖,彭华松,张雪洪. 微生物学通报. 2017(10)
[8]敞开式离子化质谱技术在中草药研究中的应用[J]. 黄鑫,刘文龙,张勇,刘淑莹. 质谱学报. 2017(01)
[9]灵芝菌丝体及发酵液中三萜化合物的研究进展[J]. 张容容,陈慧,刘高强,王晓玲. 食用菌学报. 2016(03)
[10]钙离子和水杨酸诱导灵芝多糖和三萜的合成[J]. 叶丽云,林强,刘梅,吴小平. 菌物学报. 2017(02)
博士论文
[1]等离子体诱变灵芝及其药用成分的红外光谱分析[D]. 马玉涵.中国科学技术大学 2018
[2]基于多尺度创新原理的工业微生物高通量筛选平台构建及应用研究[D]. 谭俊.华东理工大学 2013
硕士论文
[1]灵芝多糖合成途径关键酶基因过表达的研究[D]. 李瑞勤.江南大学 2017
[2]灵芝菌丝体培养中多糖组分的变化与相关酶活性分析[D]. 王琼.江南大学 2013
[3]草菇60Co诱变育种研究[D]. 林瑞虾.福建农林大学 2011
本文编号：3247085
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