α-L-鼠李糖苷酶对芦丁水解活性的分子改造
发布时间：2021-06-27 20:34
α-L-鼠李糖苷酶催化末端含α-L-鼠李糖的天然产物,该酶广泛分布于自然界,细菌、真菌、酵母、动植物体内均有报道,工业应用范围广,是生物技术应用重要的一类酶。本研究首先基于目标底物芦丁与其苷元槲皮素的紫外-可见光谱差异,利用双波长检测建立全新的高通量筛选方法,随后利用半理性设计策略,集中于广义酸基序进行定点饱和突变和定点突变,旨在最终获得水解芦丁的高活性α-L-鼠李糖苷酶突变体,并研究其突变体酶学性质,同时也探索了利用微波辅助乙醇萃取法探索从苦荞叶和苦荞茶中获得高纯度、高浓度天然芦丁提取液。本实验室前期通过检索CAZy数据库,以多形拟杆菌VPI-5482全基因组为模板成功扩增获得目的基因BtRha78A,连接至载体pET-28a,对酶学性质进行表征,与同源GH78家族α-L-鼠李糖苷酶三级结构和序列进行比对,经丙氨酸扫描突变验证,确定BtRha78A催化关键残基,对其广义酸基序研究显示,基序中一部分残基为非催化功能残基。在酸性,甲醇和碱性中测定黄酮化合物芦丁、异槲皮素与槲皮素0 min及孵育30min后250-500 nm吸收值,芦丁在400 nm具有特征峰,槲皮素在320 nm有特征...
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
三种酶分子改造策略序列改变大小与所需信息
第一章文献综述3表1.1三种常见酶分子改造策略Table1.1Threestrategiesforenzymemolecularredesign方法所需信息突变库构建突变库容量高通量筛选方法定向进化序列信息易错PCR较大需要，且要求较高理性设计结构信息与催化机理点对点突变较小不需要半理性设计结构信息定点饱和突变一般需要图1.2酶分子改造策略理性设计与定向设计历程比较[15]Fig.1.2Thecomparisonofthetwostrategiesrationaldesignanddirectedevolutionforenzymeredesign.
第一章文献综述5图1.3黄酮的基本分子结构与类型Fig.1.3Themolecularstructuresandsubgroupsoftheflavonoids.图1.4橙皮苷与柚皮苷的分子结构Fig.1.4Molecularstructuresofhesperidinandnaringin.1.2.2芦丁及其相关黄酮化合物槲皮素是一种常见的黄酮醇（图1.5），其作为苷元在3-OH位引入β-D-葡萄糖苷即为异槲皮素（图1.5），在此β-D-葡萄糖基的6-OH再引入α-L-鼠李糖基即成为芦丁（图1.5），芦丁是槲皮素的芸香糖（α-L-鼠李糖1-6-β-D-葡萄糖）苷，芦丁可被α-L-鼠李糖苷酶水解产生异槲皮素，异槲皮素在β-D-葡萄糖苷酶作用下可生物转化为槲皮素（图1.5）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]生物合成柑橘类黄酮研究进展[J]. 单杨,刘娟,王振,肖业成. 中国食品学报. 2019(11)
[2]超临界CO2萃取植物功能性油脂的研究进展[J]. 周玉凤,张海东,熊昆,申渝,陈佳,唐源桃,李晓捷,胡玥玥. 食品工业科技. 2019(20)
[3]黄酮类化合物吸收代谢及其对胃肠道功能影响的研究进展[J]. 常化松,袁雯雯,玄红专,王凯. 食品工业科技. 2019(18)
[4]四种芦丁提取方法的比较研究[J]. 涂清波,孙振翰,徐晓芳,朱安宏,吴娜,何立巍. 海峡药学. 2019(01)
[5]人粪便宏基因组α-L-鼠李糖苷酶的酶学性质及其对芦丁的生物转化[J]. 史云璐,李彬春,李艳琴. 中国生物化学与分子生物学报. 2018(12)
[6]芦丁的提取及抑菌活性研究进展[J]. 王金宏,潘琪,石铄桐,彭晓丹,于宛鑫,祖晓宁. 黑龙江医药. 2018(01)
[7]槲皮素纳米制剂及其抗肿瘤研究进展[J]. 尹华珍,于雪梅,方可华,翟光喜. 中国新药与临床杂志. 2018(01)
[8]α-L-鼠李糖苷酶以催化活性包涵体形式异源表达及其酶学性质[J]. 李彬春,张甜,吉亚茹,李艳琴,丁国斌. 食品科学. 2018(14)
[9]多形拟杆菌α-L-鼠李糖苷酶序列分析与酶学性质[J]. 李彬春,吉亚茹,李艳琴,丁国斌. 中国生物化学与分子生物学报. 2017(04)
[10]化学法结合酶法提取牛蒡中的可溶性膳食纤维[J]. 任媛媛,郝建雄,李稳,刘殿武. 中国食品添加剂. 2017(01)
博士论文
[1]利用半理性和理性策略对酶活性及手性选择性的设计[D]. 郭斐.浙江大学 2015
硕士论文
[1]新型细菌源α-L-鼠李糖苷酶挖掘及其生物转化应用[D]. 张甜.山西大学 2019
[2]多形拟杆菌α-L-鼠李糖苷酶资源挖掘及其结构分析[D]. 吉亚茹.山西大学 2018
[3]蛋白质半理性设计提高Candida Rugosa Lipase 1的热稳定性[D]. 韩蕴琪.吉林大学 2011
[4]苦荞麦叶黄酮提纯及其功能活性研究[D]. 贾雪峰.西南大学 2007
[5]槐花中总黄酮的提取及单体分离提纯研究[D]. 兰昌云.成都理工大学 2006
本文编号：3253563
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
三种酶分子改造策略序列改变大小与所需信息
第一章文献综述3表1.1三种常见酶分子改造策略Table1.1Threestrategiesforenzymemolecularredesign方法所需信息突变库构建突变库容量高通量筛选方法定向进化序列信息易错PCR较大需要，且要求较高理性设计结构信息与催化机理点对点突变较小不需要半理性设计结构信息定点饱和突变一般需要图1.2酶分子改造策略理性设计与定向设计历程比较[15]Fig.1.2Thecomparisonofthetwostrategiesrationaldesignanddirectedevolutionforenzymeredesign.
第一章文献综述5图1.3黄酮的基本分子结构与类型Fig.1.3Themolecularstructuresandsubgroupsoftheflavonoids.图1.4橙皮苷与柚皮苷的分子结构Fig.1.4Molecularstructuresofhesperidinandnaringin.1.2.2芦丁及其相关黄酮化合物槲皮素是一种常见的黄酮醇（图1.5），其作为苷元在3-OH位引入β-D-葡萄糖苷即为异槲皮素（图1.5），在此β-D-葡萄糖基的6-OH再引入α-L-鼠李糖基即成为芦丁（图1.5），芦丁是槲皮素的芸香糖（α-L-鼠李糖1-6-β-D-葡萄糖）苷，芦丁可被α-L-鼠李糖苷酶水解产生异槲皮素，异槲皮素在β-D-葡萄糖苷酶作用下可生物转化为槲皮素（图1.5）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]生物合成柑橘类黄酮研究进展[J]. 单杨,刘娟,王振,肖业成. 中国食品学报. 2019(11)
[2]超临界CO2萃取植物功能性油脂的研究进展[J]. 周玉凤,张海东,熊昆,申渝,陈佳,唐源桃,李晓捷,胡玥玥. 食品工业科技. 2019(20)
[3]黄酮类化合物吸收代谢及其对胃肠道功能影响的研究进展[J]. 常化松,袁雯雯,玄红专,王凯. 食品工业科技. 2019(18)
[4]四种芦丁提取方法的比较研究[J]. 涂清波,孙振翰,徐晓芳,朱安宏,吴娜,何立巍. 海峡药学. 2019(01)
[5]人粪便宏基因组α-L-鼠李糖苷酶的酶学性质及其对芦丁的生物转化[J]. 史云璐,李彬春,李艳琴. 中国生物化学与分子生物学报. 2018(12)
[6]芦丁的提取及抑菌活性研究进展[J]. 王金宏,潘琪,石铄桐,彭晓丹,于宛鑫,祖晓宁. 黑龙江医药. 2018(01)
[7]槲皮素纳米制剂及其抗肿瘤研究进展[J]. 尹华珍,于雪梅,方可华,翟光喜. 中国新药与临床杂志. 2018(01)
[8]α-L-鼠李糖苷酶以催化活性包涵体形式异源表达及其酶学性质[J]. 李彬春,张甜,吉亚茹,李艳琴,丁国斌. 食品科学. 2018(14)
[9]多形拟杆菌α-L-鼠李糖苷酶序列分析与酶学性质[J]. 李彬春,吉亚茹,李艳琴,丁国斌. 中国生物化学与分子生物学报. 2017(04)
[10]化学法结合酶法提取牛蒡中的可溶性膳食纤维[J]. 任媛媛,郝建雄,李稳,刘殿武. 中国食品添加剂. 2017(01)
博士论文
[1]利用半理性和理性策略对酶活性及手性选择性的设计[D]. 郭斐.浙江大学 2015
硕士论文
[1]新型细菌源α-L-鼠李糖苷酶挖掘及其生物转化应用[D]. 张甜.山西大学 2019
[2]多形拟杆菌α-L-鼠李糖苷酶资源挖掘及其结构分析[D]. 吉亚茹.山西大学 2018
[3]蛋白质半理性设计提高Candida Rugosa Lipase 1的热稳定性[D]. 韩蕴琪.吉林大学 2011
[4]苦荞麦叶黄酮提纯及其功能活性研究[D]. 贾雪峰.西南大学 2007
[5]槐花中总黄酮的提取及单体分离提纯研究[D]. 兰昌云.成都理工大学 2006
本文编号：3253563
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3253563.html
教材专著
