Nyap1在小鼠大脑皮层发育中的作用及机制研究

发布时间：2021-07-28 13:10

　　哺乳动物大脑皮质经过正常发育最终会形成致密的六层结构,该结构对大脑皮质行使正常的生理功能十分重要。大脑皮质发育异常可能导致:癫痫,认知功能障碍,小脑症和巨脑症等重大神经系统疾病发生的可能。大脑皮质的发育需要经过神经祖细胞增殖,神经元迁移,分化,建立突触联系等多项步骤协调进行。其中,神经元迁移是大脑皮层六层结构形成的基础,新出生的神经元越过原来产生的神经元到达皮质外层,依次形成“由内而外”的层状结构。PI3-激酶神经元酪氨酸磷酸化接头蛋白1（neuronal tYrosine-phosphorylated adaptor for PI3-kinase 1,Nyap1）是NYAP家族（NYAPs）中的一员,该家族还包括Nyap2和Nyap3。NYAPs有一段同源区域具有保守的酪氨酸残基和一段脯氨酸富集区域。NYAPs是大脑中主要的磷蛋白,在与PI3K相关的酪氨酸磷酸化作用中,NYAPs占据其中的四分之三。NYAPs在小鼠大脑皮质中高度表达,并且NYAPs还介导细胞中actin细胞骨架重塑。敲除NYAPs会使神经元突起生长不足,大脑皮质变薄,其中Nyap1的敲除表现得最为明显。Nyap1在整... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 小鼠大脑皮质结构及神经元迁移
    1.1 小鼠大脑皮层结构
    1.2 神经元迁移概述
        1.2.1 神经元迁移种类及过程
        1.2.2 神经元多极-双极转换
    1.3 细胞骨架与神经元迁移
    1.4 神经元迁移相关信号通路
第二章 NYAP结构及功能
    2.1 NYAPs的结构与表达模式
    2.2 NYAP介导的信号通路
    2.3 NYAP介导Actin细胞骨架重塑
    2.4 NYAP与脑部发育
第三章 过表达Nyap1 对神经元形态及迁移的影响
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 材料与试剂
        3.1.3 Nyap1 表达载体的构建
        3.1.4 细胞培养及转染
        3.1.5 细胞免疫荧光染色及拍照分析
        3.1.6 子宫内电击转染
        3.1.7 组织取材与切片制备
        3.1.8 组织免疫荧光染色及显微镜拍照
        3.1.9 统计分析
    3.2 结果
        3.2.1 pCAG-Nyap1-EGFP真核表达载体的构建
        3.2.2 Nyap1 在真核细胞中成功表达
        3.2.3 Nyap1 对神经元形态的影响
        3.2.4 Nyap1 对神经元迁移的影响
    3.3 讨论
    3.4 小结
第四章 干扰Nyap1 对神经元形态及迁移的影响
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 材料与试剂
        4.1.3 Nyap1 干扰载体构建
        4.1.4 Nyap1-R表达载体构建
        4.1.5 细胞培养及转染
        4.1.6 细胞免疫荧光染色及拍照分析
        4.1.7 蛋白样品提取
        4.1.8 Western Blot
        4.1.9 子宫内电击转染
        4.1.10 组织取材与切片制备
        4.1.11 组织免疫荧光染色及显微镜拍照
        4.1.12 统计分析
    4.2 结果
        4.2.1 表达载体的构建
        4.2.2 干扰表达载体在真核细胞中的表达
        4.2.3 shNyap1 敲降效果检测
        4.2.4 抑制Nyap1 对神经元迁移的影响
        4.2.5 抑制Nyap1 对神经元形态的影响
    4.3 讨论
    4.4 小结
第五章 Nyap1 磷酸化水平对神经元形态及迁移的影响
    5.1 材料与方法
        5.1.1 实验动物
        5.1.2 材料与试剂
        5.1.3 Nyap1 突变表达载体的构建
        5.1.4 细胞培养及转染
        5.1.5 细胞免疫荧光染色及拍照分析
        5.1.6 子宫内电击转染
        5.1.7 组织取材与切片制备
        5.1.8 组织免疫荧光染色及显微镜拍照
        5.1.9 统计分析
    5.2 结果
        5.2.1 Nyap1 磷酸化突变体真核表达载体的构建
        5.2.2 Nyap1 磷酸化突变载体在真核细胞中成功表达
        5.2.3 Nyap1 磷酸化位点突变对神经元迁移的影响
        5.2.4 Nyap1 磷酸化位点突变对神经元形态的影响
        5.2.5 Nyap1 磷酸化完全缺失对神经元迁移的影响
        5.2.6 Nyap1 磷酸化完全缺失对神经元形态的影响
    5.3 讨论
    5.4 小结
第六章 Fyn磷酸化Nyap1 调控神经元迁移
    6.1 材料与方法
        6.1.1 实验动物
        6.1.2 材料与试剂
        6.1.3 真核表达载体构建
        6.1.4 子宫内电击转染
        6.1.5 组织取材与切片制备
        6.1.6 组织免疫荧光染色及显微镜拍照
        6.1.7 统计分析
    6.2 结果
        6.2.1 超表达Nyap1 挽救shFyn导致的多极-双极转换障碍
        6.2.2 shNyap1 无法完全挽救Fyn-CA引起的神经元迁移障碍
        6.2.3 Nyap1 磷酸化缺失无法挽救shFyn导致的多极-双极转换障碍
    6.3 讨论
    6.4 小结
第七章 结论
参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]p85a基因对小鼠大脑皮层投射神经元迁移的影响[J]. 陈林华,曹华腾,涂晓萌,王教,李雪.  中国细胞生物学学报. 2014(08)

博士论文
[1]Fyn的RNA干扰和重要位点突变对神经元迁移的影响及分子机制[D]. 黄映雪.西北农林科技大学 2017
[2]Fyn在神经元迁移中的作用及分子机制研究[D]. 安磊.西北农林科技大学 2014



本文编号：3307976