植物蛋白磷酸化的检测方法

发布时间：2021-07-31 08:57

　　蛋白磷酸化是一种重要的蛋白质翻译后修饰方式,几乎参与植物所有生命过程的调节。蛋白磷酸化过程主要指在蛋白激酶的催化作用下,将三磷酸腺苷（ATP）上的γ位磷酸基团转移到底物蛋白特定氨基酸残基上的过程。底物蛋白上被磷酸化的常见氨基酸有丝氨酸、苏氨酸及酪氨酸,磷酸基团与氨基酸中的羟基通过酯键连接。该文详细描述了几种常用的蛋白质体外及体内磷酸化的检测方法及注意事项。 

【文章来源】：植物学报. 2020,55(01)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

Phos-tag gel和SDS-PAGE gel电泳后,免疫印迹检测磷酸化蛋白的对比分析

拟南芥幼苗总蛋白双向凝胶电泳后的磷酸化蛋白Pro-Q Diamond染色检测分析

(5)激酶级联反应中涉及2个以上的激酶,反应过程稍微复杂一些,但反应体系与条件不变。例如,激酶A磷酸化激活激酶B,再磷酸化底物蛋白C的反应:第1步反应体系30μL(50 mmol·L–1 Tris-HCl缓冲液,pH7.5,0.1μg激酶A,1.0μg激酶B,50μmol·L–1 ATP,10 mmol·L–1 MgCl2或MnCl2或CaCl2),30°C反应30分钟;第2步反应体系30μL(50 mmol·L–1 Tris-HCl缓冲液,pH7.5,0.1μg第1步反应激活的激酶B,1.0μg底物蛋白C,25μmol·L–1 ATP,1μCi[γ-32P]-ATP,10 mmol·L–1 MgCl2或MnCl2或CaCl2),30°C反应30分钟。加入10μL 4×SDS样品缓冲液终止反应,95°C反应5分钟。制好的样品用于凝胶电泳分离。4.2 Phos-tag gel电泳-免疫印迹结合的蛋白质磷酸化分析方法

【参考文献】：
期刊论文
[1]Regulation of p53 acetylation[J]. Wei-Guo Zhu.  Science China（Life Sciences）. 2017(03)
[2]蛋白质组中蛋白质磷酸化研究进展[J]. 杨策,王正国,朱佩芳.  生理科学进展. 2004(02)



本文编号：3313163