延边白鹅CD4、CD8基因的克隆及SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的建立

发布时间：2021-08-06 23:06

　　CD4、CD8分子是T淋巴细胞表面的抗原受体,属于白细胞分化抗原,参与T细胞活化及抗原提呈。CD4、CD8分子分别于MHCII、MHCI型分子结合,保障T细胞与所结合靶细胞之间的联系牢固,是动物机体重要的免疫过程。通过对CD4与CD8分子的克隆及检测可以观测到动物机体细胞免疫水平。本次试验旨在完成延边白鹅的CD4、CD8基因的克隆、生物信息学分析以及建立CD4、CD8基因的SYBR Green I荧光定量PCR方法。首先完成延边白鹅CD4、CD8基因的克隆,为了得到两对基因的克隆片段,此试验参照GenBank发表的JQ272858、JQ272859两对基因组序列设计扩增CD4、CD8基因两对引物,分别在延边白鹅血液中以及延边白鹅七日龄小鹅的胸腺中分离T淋巴细胞并提取细胞内mRNA,将所提取的mRNA反转录为cDNA,利用设计引物在cDNA内克隆CD4、CD8基因,鉴定及测序正确后,对所得结果进行了初步生物信息学分析。结果显示,此实验成功克隆得到了片段大小分别为1 443bp的延边白鹅CD4分子以及片段大小为711bp的延边白鹅CD8分子。蛋白质的三级结构预测显示,延边白鹅的CD4蛋白所... 

【文章来源】：延边大学吉林省 211工程院校

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２延边白鹅ＣＤ８基因扩增结果??

１．延边白鹅ＣＤ４、ＧＤ８基因的扩增??通过延边白鹅外周血所得ｃＤＮＡ在引物ＣＤ４－ＦＰ１和ＣＤ４－ＲＰ１进行ＰＣＲ扩??增后，可见在１?４４３ｂｐ处有明显特异性扩增条带，如图１所示。??Ｍ?１??■Ｈ??Ｉ?Ｕ??图１延边白鹅ＣＤ４基因扩增结果??Ｍ?鹅?ＣＤ４?基因的?ＰＣＲ?产物，１?ＤＬ２?０００?ＤＭＡ?Ｍａｒｋｅｒ?（Ｔａｋａｒａ?ＤＬ．?２０００）??ＦＩＧ?１?ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣＤ４?ｇｅｎｅ?ｏｆ?Ｙａｎｂｉａｎ?ｗｈｉｔｅ??Ｍ?ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＣＤ４?ｇｏｏｓｅ，?１?ＤＬ２?０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?（Ｔａｋａｒａ?ＤＬ．２０００）??通过延边白鹅外周血所得ｃＤＮＡ在引物ＣＤ８－ＦＰ１和ＣＤＳ－ＲＰｌ进行ＰＣＲ扩??増后，在７１１ｂｐ处有明显特异性扩增条带。可见如图２所示。??Ｍ?１??■■■??７１１?ｂｐ?—??ｍｍ??图２延边白鹅ＣＤ８基因扩增结果??Ｍ?鹅?ＣＤ８?基因的?ＰＣＲ?产物，１?ＤＬ２?０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?（Ｔａｋａｒａ?ＤＬ．?２０００）??ＦＩＧ?２?ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣＤ８?ｇｅｎｅ?ｏｆ?Ｙａｎｂｉａｎ?ｗｈｉｔｅ??Ｍ?ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＣＤ８?ｇｏｏｓｅ，?１?ＤＬ２?０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?（Ｔａｋａｒａ?ＤＬ．?２０００）??１５??

链基团的进一步卷曲、折叠以及次级键之间的相互作用下，延边白鹅的ＣＤ４蛋??白所编码的４８０个氨基酸，ａ螺旋与Ｐ折叠占ＣＤ４总蛋白的一半以上，形成了复杂??的髙级结构，保证了?ＣＤ４蛋白的重要免疫作用。如图７。??１７??


本文编号：3326654