应用于间充质干细胞体外扩增的无血清培养基的研究
发布时间：2021-08-06 19:57
间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）由于其优异的免疫调节及分化潜能,被公认为再生医学领域最有前景的细胞之一。但是供体组织直接分离出的MSCs数量有限,而现有的MSCs扩增用含血清培养基无法应用于临床,商业化无血清培养基又存在诸如对MSCs功能特性的维持能力较差等问题,导致MSCs相关的临床应用面临较大阻碍。究其原因,主要是对培养基中关键因子对细胞增殖及功能的影响及其相关机制的认识十分有限。而血清成分不明,商业化无血清培养基成分保密,因此无法基于这些培养基探究培养基组分对扩增的BMSCs生物学特性的影响,也无法精确调控细胞行为。针对上述问题,本文采用实验方法设计适合大鼠骨髓来源MSCs（Bone marrow-derived MSCs,BMSCs）体外扩增并维持其功能特性的无血清培养基,进一步探究关键组分转化生长因子（Transforming growth factor-β31,TGF-β31）对BMSCs增殖的影响及其分子机制。根据BMSCs的生物学特性和文献调研选择了19种无血清培养基的添加成分,采用Plackett-Burman设计方法,以细胞增殖...
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１?ＭＳＣｓ的来源及特性＿??Ｆｉｇ?１．１?ＭＳＣｓ?ｓｏｕｒｃｅｓ?ａｎｄ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ??
２．３．２．１?０Ｍ中ＢＭＳＣｓ的形态观察和增殖检测??将Ｐ４代或Ｐ５代ＢＭＳＣｓ以ｌｘｌ〇４?ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２的密度接种至上述各组培养基后，培养??至第６天观察细胞形态。由图２．４?（ａ）可知，对照组含血清培养基ＳＣＭ和商业化无血??清培养基Ｌｚ中细胞呈细长的梭状，鱼群状分布，细胞汇合率达到９０％以上。实验组中，??Ｏｐｔ－１、Ｏｐｔ－７、Ｏｐｔ－８、Ｏｐｔ－１５、Ｏｐｔ－１８无血清培养基中ＢＭＳＣｓ能够进行贴壁生长，细??胞呈梭状，密度较其他５组更高，与图２．１中的对应初筛培养基相比，细胞数量和形态??均得到改善，但仍差于ＳＣＭ组和Ｌｚ组。其他５组中细胞数量较少，其中，Ｏｐｔ－９、Ｏｐｔ－??１３和Ｏｐｔ－２０中细胞成簇生长，Ｏｐｔ－２１和Ｏｐｔ－２２中虽有部分细胞贴壁，但细胞数量较??少。图２．４（ｂ）为Ｐ５代ＢＭＳＣｓ在ＯＭ各培养基中培养至第６天的形态，和Ｐ４代ＢＭＳＣｓ??相比，无明显差别。??
图２．４?ＯＭ中ＢＭＳＣｓ的形态??Ｆｉｇ．２．４?ＢＭＳＣｓ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｉｎ?ＯＭ??用ＣＣＫ－８试剂盒测定ＢＭＳＣｓ在各组培养基中的增殖情况。如图２．５所示，Ｌｚ组和??ＳＣＭ组细胞增殖基本相当。和初筛无血清培养基实验组（见图２．２）相比，０？１－１、０卩１－??７、Ｏｐｔ－８、Ｏｐｔ－１５、Ｏｐｔ－１８实验组在第６天获得的细胞数有明显提升。??ａ??３．０－｜??２－５－?｜??ｌｌｉｌｉｉ??ｂ?＃?〇今?〇／?〇／?ｃ／?〇／?ｃ／?ｃ／?Ｖ?＃??Ａ?Ｍｅｄｉｕｍ??茗?１２０－??＾１００－?ｎ??１?８０－?ｉ??２?６〇ｉ｜｜｜｜ｉ｜ｆｌ｜ｎ?ａｌｌｌ?Ｉ?ｍ?ｈ??１?－；ＰＰ??Ｍｅｄｉｕｍ??□?Ｐ４－ｔｈｅ?ｆｉｒｓｔ?ｂａｔｃｈ?□?Ｐ４－ｔｈｅ?ｓｅｃｏｎｄ?ｂａｔｃｈ?■?Ｐ４－ｔｈｅ?ｔｈｉｒｄ?ｂ
【参考文献】：
期刊论文
[1]Vero细胞无血清培养基的优化[J]. 段盼盼,杨帆,耿兴良,龙云凤,郭琦,龙艺,王明清,廖国阳,李卫东. 中国生物制品学杂志. 2015(05)
[2]Vero细胞无血清培养基的研究进展[J]. 张香玲,李薇. 微生物学免疫学进展. 2015(02)
[3]Stem cells, a two-edged sword: Risks and potentials of regenerative medicine[J]. Anna Chiara Piscaglia. World Journal of Gastroenterology. 2008(27)
[4]动物细胞无血清培养基的研究与设计方法[J]. 王永民,陈昭烈. 中国生物工程杂志. 2007(01)
[5]间充质干细胞在神经系统中的应用[J]. 杨志刚,吴晓牧. 实用临床医学. 2005(08)
本文编号：3326392
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１?ＭＳＣｓ的来源及特性＿??Ｆｉｇ?１．１?ＭＳＣｓ?ｓｏｕｒｃｅｓ?ａｎｄ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ??
２．３．２．１?０Ｍ中ＢＭＳＣｓ的形态观察和增殖检测??将Ｐ４代或Ｐ５代ＢＭＳＣｓ以ｌｘｌ〇４?ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２的密度接种至上述各组培养基后，培养??至第６天观察细胞形态。由图２．４?（ａ）可知，对照组含血清培养基ＳＣＭ和商业化无血??清培养基Ｌｚ中细胞呈细长的梭状，鱼群状分布，细胞汇合率达到９０％以上。实验组中，??Ｏｐｔ－１、Ｏｐｔ－７、Ｏｐｔ－８、Ｏｐｔ－１５、Ｏｐｔ－１８无血清培养基中ＢＭＳＣｓ能够进行贴壁生长，细??胞呈梭状，密度较其他５组更高，与图２．１中的对应初筛培养基相比，细胞数量和形态??均得到改善，但仍差于ＳＣＭ组和Ｌｚ组。其他５组中细胞数量较少，其中，Ｏｐｔ－９、Ｏｐｔ－??１３和Ｏｐｔ－２０中细胞成簇生长，Ｏｐｔ－２１和Ｏｐｔ－２２中虽有部分细胞贴壁，但细胞数量较??少。图２．４（ｂ）为Ｐ５代ＢＭＳＣｓ在ＯＭ各培养基中培养至第６天的形态，和Ｐ４代ＢＭＳＣｓ??相比，无明显差别。??
图２．４?ＯＭ中ＢＭＳＣｓ的形态??Ｆｉｇ．２．４?ＢＭＳＣｓ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｉｎ?ＯＭ??用ＣＣＫ－８试剂盒测定ＢＭＳＣｓ在各组培养基中的增殖情况。如图２．５所示，Ｌｚ组和??ＳＣＭ组细胞增殖基本相当。和初筛无血清培养基实验组（见图２．２）相比，０？１－１、０卩１－??７、Ｏｐｔ－８、Ｏｐｔ－１５、Ｏｐｔ－１８实验组在第６天获得的细胞数有明显提升。??ａ??３．０－｜??２－５－?｜??ｌｌｉｌｉｉ??ｂ?＃?〇今?〇／?〇／?ｃ／?〇／?ｃ／?ｃ／?Ｖ?＃??Ａ?Ｍｅｄｉｕｍ??茗?１２０－??＾１００－?ｎ??１?８０－?ｉ??２?６〇ｉ｜｜｜｜ｉ｜ｆｌ｜ｎ?ａｌｌｌ?Ｉ?ｍ?ｈ??１?－；ＰＰ??Ｍｅｄｉｕｍ??□?Ｐ４－ｔｈｅ?ｆｉｒｓｔ?ｂａｔｃｈ?□?Ｐ４－ｔｈｅ?ｓｅｃｏｎｄ?ｂａｔｃｈ?■?Ｐ４－ｔｈｅ?ｔｈｉｒｄ?ｂ
【参考文献】：
期刊论文
[1]Vero细胞无血清培养基的优化[J]. 段盼盼,杨帆,耿兴良,龙云凤,郭琦,龙艺,王明清,廖国阳,李卫东. 中国生物制品学杂志. 2015(05)
[2]Vero细胞无血清培养基的研究进展[J]. 张香玲,李薇. 微生物学免疫学进展. 2015(02)
[3]Stem cells, a two-edged sword: Risks and potentials of regenerative medicine[J]. Anna Chiara Piscaglia. World Journal of Gastroenterology. 2008(27)
[4]动物细胞无血清培养基的研究与设计方法[J]. 王永民,陈昭烈. 中国生物工程杂志. 2007(01)
[5]间充质干细胞在神经系统中的应用[J]. 杨志刚,吴晓牧. 实用临床医学. 2005(08)
本文编号：3326392
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