基于CRISPR-Cas9技术构建gpr41基因敲除的RAW264.7细胞系

发布时间：2021-08-13 05:06

　　采用CRISPR-Cas9基因编辑技术,构建G-蛋白偶联受体41（gpr41）基因敲除的RAW264.7细胞系。利用慢病毒转染,构建稳定表达Cas9蛋白的巨噬细胞株。针对gpr41基因作用的功能区域,设计靶向gpr41基因的向导RNA（gRNA）,构建pLenticrisprV2重组质粒转化DH5α感受态细胞,筛选出重组子测序验证gRNA的有效性。鉴定成功的pLenticrisprV2-gpr41-gRNA重组质粒采用转染试剂转染巨噬细胞系RAW264.7。筛选阳性单克隆细胞株,Western blot检测gpr41基因的表达。测序结果证实pLenticrisprV2-gpr41-gRNA重组质粒构建成功;Western blot筛选出重组质粒pLenticrisprV2-gpr41-gRNA3转染RAW264.7细胞13号单克隆株的GPR41蛋白不表达。利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功构建了gpr41基因敲除的巨噬细胞株,为研究gpr41基因在RAW264.7细胞中的作用机制奠定基础。 

【文章来源】：安徽医科大学学报. 2020,55(05)北大核心

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

pLenticrisprV2质粒酶切图

选择野生型细胞系和敲除型细胞系在蛋白水平上检测GPR41表达情况。Western blot结果显示,野生型细胞中GPR41蛋白正常表达,而敲除型细胞中检测不到GPR41蛋白的表达(图2)。图2 GPR41蛋白水平检测

GPR41蛋白水平检测

【参考文献】：
期刊论文
[1]巨噬细胞:一种理想的细胞骨架观察教学材料[J]. 薛雅蓉,庄重,候冬霞,汪水娟.  中国细胞生物学学报. 2019(09)
[2]Short-chain fatty acids act as antiinflammatory mediators by regulating prostaglandin E2 and cytokines[J]. Mary Ann Cox,James Jackson,Michaela Stanton,Alberto Rojas-Triana,Loretta Bober,Maureen Laverty,Frederick Monsma,Galya Vassileva,Maureen Maguire,Eric Gustafson,Marvin Bayne,Daniel Lundell,Chung-Her Jenh.  World Journal of Gastroenterology. 2009(44)



本文编号：3339806