亚油酸异构酶定向进化研究
发布时间：2021-08-13 15:46
共轭亚油酸（Conjugated Linoleic Acid,CLA）是一类具有不同位置和几何异构体的十八碳二烯酸的总称。CLA因结构多样而具有不同的生理功能,目前研究较多的活性异构体为c9,t11-CLA和t10,c12-CLA。生物合成法利用亚油酸异构酶催化LA生成不同类型的CLA,因其产物结构单一、安全性更高而受到研究人员的青睐,但是亚油酸异构酶催化能力仍有待提高。本研究以发酵乳中分离的植物乳杆菌和市售痤疮丙酸杆菌基因组为模板,克隆表达植物乳杆菌的肌球蛋白交叉反应抗原基因（Myosin-Cross-Reactive Antigen,mcra）和痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶基因（linoleic acid isomerase gene,lai）,利用易错PCR突变两种基因,获得吸光度值和CLA产量可能提高的菌株,通过流式细胞术筛选携带绿色荧光蛋白标签的重组菌,快速得到正突变子,对部分提高显著的突变株测序,分析突变前后的亚油酸异构酶基因,探究差异位点对产量的影响。从五份内蒙古传统发酵乳中筛选鉴定到10菌株,选择CLA产量较高的植物乳杆菌HAC01,测定其发酵性能,利用均匀设计优化发酵条件...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
c9，t11-CLA和t10，c12-CLA结构图
沈阳农业大学硕士学位论文17图2-1CLA标准曲线Fig.2-1CLAstandardcurve2.3.4基因组提取用细菌基因组DNA提取试剂盒提取已筛选的乳酸菌基因组，试剂盒中提供的溶液有：蛋白酶K、BufferGL、BufferGW1、BufferGW2、洗脱缓冲液GE，需自备溶菌酶溶液。具体操作见附录一，提取后用超微量核酸蛋白定量仪测定提取物的DNA浓度。用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测结果，以DL2000作为DNAMarker。2.3.5PCR扩增稀释基因组DNA至终浓度为20ng/μL，以此为模板，用16S引物进行PCR扩增，反应体系见表2-2，反应程序见表2-3，用1％琼脂糖凝胶电泳检测，以DL2000作为DNAMarker，PCR结果验证成功送交上海派森诺生物科技股份有限公司测序。表2-2PCR体系Table2-2PCRsystem体系组分反应体系（μL）组分终浓度反应体系（μL）组分终浓度2×EsTaqMasterMix(Dye)模板DNA（20ng/μL）55×255×12ng/μL52ng/μL上游引物（1pmol/μL）10.1pmol/μL50.1pmol/μL下游引物（1pmol/μL）10.1pmol/μL50.1pmol/μLddH2O2-10-总体积5-50
6S鉴定Fig.2-216Sidentification
【参考文献】：
期刊论文
[1]共轭亚油酸改善肥胖糖尿病小鼠的糖脂代谢[J]. 夏珺,郑明月,李灵杰,侯旭峰,曾位森. 南方医科大学学报. 2019(06)
[2]利用流式分选技术富集空载质粒转染特定巨噬细胞的方法及条件优化[J]. 吴昊,王敏,罗贤强,郭建春,郑斌娇. 温州医科大学学报. 2019(06)
[3]共轭亚油酸降低脂肪沉积的分子机制研究进展[J]. 伏春燕,张燕,魏祥法,刘雪兰. 动物营养学报. 2019(08)
[4]共轭亚油酸的免疫调节机理及对猪免疫力调节的研究进展[J]. 董小英,宾艳芳,唐胜球. 广东饲料. 2018(10)
[5]易错PCR技术定向进化褐藻胶裂解酶Alg-2的分析[J]. 李树,张伟,赵春梅. 食品科学. 2019(04)
[6]开菲尔粒中干酪乳杆菌的分离鉴定及发酵性能分析[J]. 巩小芬,严琪钰,王雨童,王江月,高恩燕,张恩鹏,刘朋龙,王亮. 中国乳品工业. 2018(06)
[7]微生物发酵制备富含共轭亚油酸酸豆乳的研究[J]. 高辉,李盟,朱振元,宋巧英,邱靖一,王艺臻,刘婷婷. 食品研究与开发. 2018(05)
[8]搅拌型酸乳的流变学分析[J]. 曾羲. 轻工科技. 2018(03)
[9]流式细胞分选优化经验浅谈[J]. 刘洋,王丽婷,刘芳,冉海莹. 科学咨询（科技·管理）. 2018(01)
[10]定向进化技术的最新进展[J]. 曲戈,赵晶,郑平,孙际宾,孙周通. 生物工程学报. 2018(01)
博士论文
[1]乳酸菌生物转化共轭亚油酸的研究[D]. 杨波.江南大学 2014
[2]亚油酸异构酶基因在产油真菌中的异源表达及产物的生物合成[D]. 张白曦.江南大学 2013
硕士论文
[1]t10,c12-共轭亚油酸的特异性生物合成及其对SD大鼠乳腺肿瘤的抑制作用[D]. 张凯强.南昌大学 2019
[2]黄油中共轭亚油酸对DMBA诱导小鼠乳腺癌的抑制作用及机理研究[D]. 李慧美.南昌大学 2019
[3]纳豆激酶热稳定性及pH稳定性的改造研究[D]. 赵菡.江南大学 2018
[4]亚油酸异构酶在原核生物中的异源表达[D]. 黄昕畑.江南大学 2018
[5]植物乳杆菌P-8亚油酸异构酶酶学性质及必需基团的研究[D]. 赵黎黎.内蒙古农业大学 2017
[6]基于GC-MS的微生物代谢组学在植物乳杆菌生物转化共轭亚油酸中的应用[D]. 陶瑞.江南大学 2017
[7]重组亚油酸异构酶在乳酸克鲁维酵母中表达条件的优化及微囊化[D]. 李晨曦.内蒙古农业大学 2016
[8]内蒙传统发酵奶油制品中CLA产生菌的筛选及发酵条件优化[D]. 刘春晓.内蒙古农业大学 2016
[9]生物催化法合成反10,顺12-共轭亚油酸的研究[D]. 宋宇航.江南大学 2016
[10]通过定向进化和半理性设计提高顺式环氧琥珀酸水解酶的热稳定性的研究[D]. 乔沛.浙江大学 2016
本文编号：3340706
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
c9，t11-CLA和t10，c12-CLA结构图
沈阳农业大学硕士学位论文17图2-1CLA标准曲线Fig.2-1CLAstandardcurve2.3.4基因组提取用细菌基因组DNA提取试剂盒提取已筛选的乳酸菌基因组，试剂盒中提供的溶液有：蛋白酶K、BufferGL、BufferGW1、BufferGW2、洗脱缓冲液GE，需自备溶菌酶溶液。具体操作见附录一，提取后用超微量核酸蛋白定量仪测定提取物的DNA浓度。用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测结果，以DL2000作为DNAMarker。2.3.5PCR扩增稀释基因组DNA至终浓度为20ng/μL，以此为模板，用16S引物进行PCR扩增，反应体系见表2-2，反应程序见表2-3，用1％琼脂糖凝胶电泳检测，以DL2000作为DNAMarker，PCR结果验证成功送交上海派森诺生物科技股份有限公司测序。表2-2PCR体系Table2-2PCRsystem体系组分反应体系（μL）组分终浓度反应体系（μL）组分终浓度2×EsTaqMasterMix(Dye)模板DNA（20ng/μL）55×255×12ng/μL52ng/μL上游引物（1pmol/μL）10.1pmol/μL50.1pmol/μL下游引物（1pmol/μL）10.1pmol/μL50.1pmol/μLddH2O2-10-总体积5-50
6S鉴定Fig.2-216Sidentification
【参考文献】：
期刊论文
[1]共轭亚油酸改善肥胖糖尿病小鼠的糖脂代谢[J]. 夏珺,郑明月,李灵杰,侯旭峰,曾位森. 南方医科大学学报. 2019(06)
[2]利用流式分选技术富集空载质粒转染特定巨噬细胞的方法及条件优化[J]. 吴昊,王敏,罗贤强,郭建春,郑斌娇. 温州医科大学学报. 2019(06)
[3]共轭亚油酸降低脂肪沉积的分子机制研究进展[J]. 伏春燕,张燕,魏祥法,刘雪兰. 动物营养学报. 2019(08)
[4]共轭亚油酸的免疫调节机理及对猪免疫力调节的研究进展[J]. 董小英,宾艳芳,唐胜球. 广东饲料. 2018(10)
[5]易错PCR技术定向进化褐藻胶裂解酶Alg-2的分析[J]. 李树,张伟,赵春梅. 食品科学. 2019(04)
[6]开菲尔粒中干酪乳杆菌的分离鉴定及发酵性能分析[J]. 巩小芬,严琪钰,王雨童,王江月,高恩燕,张恩鹏,刘朋龙,王亮. 中国乳品工业. 2018(06)
[7]微生物发酵制备富含共轭亚油酸酸豆乳的研究[J]. 高辉,李盟,朱振元,宋巧英,邱靖一,王艺臻,刘婷婷. 食品研究与开发. 2018(05)
[8]搅拌型酸乳的流变学分析[J]. 曾羲. 轻工科技. 2018(03)
[9]流式细胞分选优化经验浅谈[J]. 刘洋,王丽婷,刘芳,冉海莹. 科学咨询（科技·管理）. 2018(01)
[10]定向进化技术的最新进展[J]. 曲戈,赵晶,郑平,孙际宾,孙周通. 生物工程学报. 2018(01)
博士论文
[1]乳酸菌生物转化共轭亚油酸的研究[D]. 杨波.江南大学 2014
[2]亚油酸异构酶基因在产油真菌中的异源表达及产物的生物合成[D]. 张白曦.江南大学 2013
硕士论文
[1]t10,c12-共轭亚油酸的特异性生物合成及其对SD大鼠乳腺肿瘤的抑制作用[D]. 张凯强.南昌大学 2019
[2]黄油中共轭亚油酸对DMBA诱导小鼠乳腺癌的抑制作用及机理研究[D]. 李慧美.南昌大学 2019
[3]纳豆激酶热稳定性及pH稳定性的改造研究[D]. 赵菡.江南大学 2018
[4]亚油酸异构酶在原核生物中的异源表达[D]. 黄昕畑.江南大学 2018
[5]植物乳杆菌P-8亚油酸异构酶酶学性质及必需基团的研究[D]. 赵黎黎.内蒙古农业大学 2017
[6]基于GC-MS的微生物代谢组学在植物乳杆菌生物转化共轭亚油酸中的应用[D]. 陶瑞.江南大学 2017
[7]重组亚油酸异构酶在乳酸克鲁维酵母中表达条件的优化及微囊化[D]. 李晨曦.内蒙古农业大学 2016
[8]内蒙传统发酵奶油制品中CLA产生菌的筛选及发酵条件优化[D]. 刘春晓.内蒙古农业大学 2016
[9]生物催化法合成反10,顺12-共轭亚油酸的研究[D]. 宋宇航.江南大学 2016
[10]通过定向进化和半理性设计提高顺式环氧琥珀酸水解酶的热稳定性的研究[D]. 乔沛.浙江大学 2016
本文编号：3340706
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