间充质干细胞源性外泌体的检测方法
发布时间：2021-08-18 14:43
背景:间充质干细胞源性外泌体因其众多优点被应用于多种疾病的诊断与治疗,因此精确有效以及低成本检测出间充质干细胞源性外泌体对将来疾病的诊断和治疗至关重要。目的:对间充质干细胞源性外泌体检测方法以及最新进展做一介绍。方法:检索万方、百度学术、维普、CNKI、PubMed、Web of Science、Sinomed、Embase、Cochrane、Web of Knowledge等数据库1997年6月至2019年6月期间关于间充质干细胞源性外泌体检测方法的文献,检索词分别为"间充质干细胞""外泌体""检测方法"和"mesenchymal stem cells""exosomes""detection methods"。排除重复与相关性弱的文献,将检索到的文献进行整理,共纳入60篇文献来进行分析。结果与结论:①总结了间充质干细胞的定义、生物学特性及其旁分泌作用;②总结了间充质干细胞源性外泌体的定义、生物学特性及其在临床治疗中较好的应用前景,例如调节机体免疫功能、促进受损组织再生等;③总结了目前对间充质干细胞源性外泌体常用的检测方法以及最新研究进展;④上述研究为临床应用间充质干细胞源性外泌体治...
【文章来源】：中国组织工程研究. 2020,24(13)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
外泌体的检测方法[15]
外泌体作为细胞间信息交流的重要介质，在组织修复、免疫等领域发挥独特的生物学功能，具有广阔的研究和应用前景。如何高效、高纯度地分离外泌体是实现其组学分析和功能研究的关键。实际上除了不同来源细胞分泌的外泌体存在异质性之外，同种细胞来源的外泌体也有可能大小形态各异。外泌体的体积小、密度低、分离难度大，而且不同分离方法得到的外泌体理化性质不同，这导致了外泌体研究存在大量不可控性和难重复性。如今已经开发了许多基于外泌体物理及生物化学性质的分离技术，如超速离心法、密度梯度离心法、超滤法以及目前比较成熟的商用化试剂盒等。超速离心法是目前外泌体分离的“金标准”，也是使用最广泛的方法。超速离心法工作原理：基于外泌体的大小，大的较早沉淀在管底，而小的需更大的离心力才能沉淀。可溶性组分不受离心影响，但是非外泌体颗粒如脂蛋白和蛋白质聚集体可能会一同沉淀[20]。超速离心法的缺点在于仪器昂贵、耗时费力、产量低且重复离心操作可能对外泌体造成破坏。密度梯度离心法分离原理：基于外泌体的密度，可从不同密度的颗粒分离出外泌体，外泌体移动至其平衡密度，而高密度的可溶性组分将在管底沉淀[20]。密度梯度离心法获得的外泌体纯度较高，但是步骤繁琐且耗时。超滤法则是利用不同截留相对分子质量的超滤膜对样品进行选择性分离，可溶性蛋白质和小于临界值(约105 kD)的颗粒被推向过滤膜，然后在过滤膜处收集外泌体[20]。虽然超滤法简单高效，但超滤过膜时加压可引起外泌体变形或破坏且可能受蛋白污染。目前用得较多的商用化试剂盒是Exo Quick试剂盒和Isolation试剂盒，这2种试剂盒都是基于沉淀法原理来分离外泌体。Exo Quick试剂盒是通过一种螯合物对外泌体进行捕捉，Isolation试剂盒是通过将水分子聚合到一起，强行减少可溶性成分，使其从溶液中析出，之后经过低速离心即可收集外泌体[21]。虽然商用化试剂盒分离外泌体速度快、产量高，但是价格较昂贵且有一定的细胞毒性。目前分离外泌体的方法众多，但是还没有同时满足外泌体高浓度及高产量的方法，这将影响后续准确高效地检测外泌体的物理及生物化学性质。
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞外囊泡的分离及鉴定方法[J]. 边素艳,刘宏斌. 新医学. 2019(09)
[2]间充质干细胞源性外泌体及其在创面修复中的研究进展[J]. 刘青武,陈佳,蒙玉娇,冯放,郭昕炜,郭简宁,张金超,林燕,何秀娟,李萍. 中国临床药理学与治疗学. 2019(07)
[3]人脐带间充质干细胞来源外泌体提取方法的比较[J]. 郭莹,王秀伟,牛玉虎,王莉,周楠,李佰一,王振东,张蘋,高亚杰,牛勃. 中国组织工程研究. 2018(09)
[4]间充质干细胞源性外泌体研究进展[J]. 杨前,刁波. 华南国防医学杂志. 2018(02)
[5]PEG 6000快速提取间充质干细胞外泌体[J]. 梁亚会,郭子宽,王芳,王恒湘,张青宜. 空军医学杂志. 2017(03)
[6]外泌体内分子标志物检测及其临床应用[J]. 许文荣,孙瑶湘. 临床检验杂志. 2017(03)
[7]干细胞源性外泌体在创面修复中的作用研究进展[J]. 李梦芸,刘德伍,毛远桂. 中华烧伤杂志. 2017 (03)
[8]脐带间充质干细胞外泌体的分离和鉴定[J]. 肖漓,白剑,陈文,黄海燕,何秀云,韩永,许晓光,樊文梅,毕丽丽,高钰,孔祥瑞,魏玉香,石炳毅. 中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2016(04)
[9]人脐血间充质干细胞来源的外泌体:分离鉴定及生物学特性[J]. 张娟,刘峰,张薇,丛旭,王彩生,魏来. 中国组织工程研究. 2014(37)
[10]旋转超滤:一种提取细胞外泌体的新方法[J]. 胡国文,李青,牛鑫,胡斌,刘鹃,沈晓黎,汪泱,邓志锋. 第二军医大学学报. 2014(06)
本文编号：3350082
【文章来源】：中国组织工程研究. 2020,24(13)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
外泌体的检测方法[15]
外泌体作为细胞间信息交流的重要介质，在组织修复、免疫等领域发挥独特的生物学功能，具有广阔的研究和应用前景。如何高效、高纯度地分离外泌体是实现其组学分析和功能研究的关键。实际上除了不同来源细胞分泌的外泌体存在异质性之外，同种细胞来源的外泌体也有可能大小形态各异。外泌体的体积小、密度低、分离难度大，而且不同分离方法得到的外泌体理化性质不同，这导致了外泌体研究存在大量不可控性和难重复性。如今已经开发了许多基于外泌体物理及生物化学性质的分离技术，如超速离心法、密度梯度离心法、超滤法以及目前比较成熟的商用化试剂盒等。超速离心法是目前外泌体分离的“金标准”，也是使用最广泛的方法。超速离心法工作原理：基于外泌体的大小，大的较早沉淀在管底，而小的需更大的离心力才能沉淀。可溶性组分不受离心影响，但是非外泌体颗粒如脂蛋白和蛋白质聚集体可能会一同沉淀[20]。超速离心法的缺点在于仪器昂贵、耗时费力、产量低且重复离心操作可能对外泌体造成破坏。密度梯度离心法分离原理：基于外泌体的密度，可从不同密度的颗粒分离出外泌体，外泌体移动至其平衡密度，而高密度的可溶性组分将在管底沉淀[20]。密度梯度离心法获得的外泌体纯度较高，但是步骤繁琐且耗时。超滤法则是利用不同截留相对分子质量的超滤膜对样品进行选择性分离，可溶性蛋白质和小于临界值(约105 kD)的颗粒被推向过滤膜，然后在过滤膜处收集外泌体[20]。虽然超滤法简单高效，但超滤过膜时加压可引起外泌体变形或破坏且可能受蛋白污染。目前用得较多的商用化试剂盒是Exo Quick试剂盒和Isolation试剂盒，这2种试剂盒都是基于沉淀法原理来分离外泌体。Exo Quick试剂盒是通过一种螯合物对外泌体进行捕捉，Isolation试剂盒是通过将水分子聚合到一起，强行减少可溶性成分，使其从溶液中析出，之后经过低速离心即可收集外泌体[21]。虽然商用化试剂盒分离外泌体速度快、产量高，但是价格较昂贵且有一定的细胞毒性。目前分离外泌体的方法众多，但是还没有同时满足外泌体高浓度及高产量的方法，这将影响后续准确高效地检测外泌体的物理及生物化学性质。
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞外囊泡的分离及鉴定方法[J]. 边素艳,刘宏斌. 新医学. 2019(09)
[2]间充质干细胞源性外泌体及其在创面修复中的研究进展[J]. 刘青武,陈佳,蒙玉娇,冯放,郭昕炜,郭简宁,张金超,林燕,何秀娟,李萍. 中国临床药理学与治疗学. 2019(07)
[3]人脐带间充质干细胞来源外泌体提取方法的比较[J]. 郭莹,王秀伟,牛玉虎,王莉,周楠,李佰一,王振东,张蘋,高亚杰,牛勃. 中国组织工程研究. 2018(09)
[4]间充质干细胞源性外泌体研究进展[J]. 杨前,刁波. 华南国防医学杂志. 2018(02)
[5]PEG 6000快速提取间充质干细胞外泌体[J]. 梁亚会,郭子宽,王芳,王恒湘,张青宜. 空军医学杂志. 2017(03)
[6]外泌体内分子标志物检测及其临床应用[J]. 许文荣,孙瑶湘. 临床检验杂志. 2017(03)
[7]干细胞源性外泌体在创面修复中的作用研究进展[J]. 李梦芸,刘德伍,毛远桂. 中华烧伤杂志. 2017 (03)
[8]脐带间充质干细胞外泌体的分离和鉴定[J]. 肖漓,白剑,陈文,黄海燕,何秀云,韩永,许晓光,樊文梅,毕丽丽,高钰,孔祥瑞,魏玉香,石炳毅. 中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2016(04)
[9]人脐血间充质干细胞来源的外泌体:分离鉴定及生物学特性[J]. 张娟,刘峰,张薇,丛旭,王彩生,魏来. 中国组织工程研究. 2014(37)
[10]旋转超滤:一种提取细胞外泌体的新方法[J]. 胡国文,李青,牛鑫,胡斌,刘鹃,沈晓黎,汪泱,邓志锋. 第二军医大学学报. 2014(06)
本文编号：3350082
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