本氏烟高效转化体系的建立及表达ORMV-126KDa复制酶植物的获得
发布时间：2021-08-19 11:25
油菜花叶病毒（Oil-Seed Mosaic Virus,ORMV）是一种典型的烟草花叶病毒属病毒,能侵染油菜、拟南芥等十字花科植物。该RNA病毒编码4种蛋白质,分别为126kDa复制酶蛋白、183kDa复制酶蛋白、运动蛋白和外壳蛋白,其中126kDa复制酶蛋白可以在体外特异性地结合21nt的小RNA,进而影响靶mRNA的表达及功能。本研究在拟南芥和本氏烟中过量表达ORMV-126kDa复制酶蛋白,为进一步研究该蛋白对植物体内小RNA的富集作用及该蛋白对小RNA功能和代谢的影响打下基础。本实验以野生型本氏烟草（Nicotiana benthamiana）的叶片为外植体,研究了不同激素配比和激素浓度对烟草离体再生分化的影响、不同AgNO3浓度及不同结冷胶浓度对生芽的影响和不同NAA浓度对生根的影响,对本氏烟草离体再生体系进行优化;同时研究了不同卡那霉素（Kanamycin,Kan）和草甘膦（Basta）的筛选浓度、头孢霉素的抑菌浓度、侵染时间、预培养及共培养时间和乙酰丁香酮（Acetosyringone,AS）浓度对烟草遗传转化的影响。建立了高效的本氏烟遗传转化体系...
【文章来源】：聊城大学山东省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
诱导表达的双组分系统
件的 pMDC150 和含有响应元件的 pMDC160。主要作用原理为：激活元件中的 35S启动子启动 XVE 基因表达并产生转录激活因子，用 17β-雌二醇进行诱导后，转录激活因子 XVE 会结合 OlexA-TATA 启动子，进而启动下游 GUS 基因的表达[35]。图 1-1 诱导表达的双组分系统[35]Figure 1-1 Two-component system for inducing expression
图 1-3 农杆菌介导的遗传转化模型[43]Figure 1-3 Agrobacterium-mediated genetic transformation model1.3.2 农杆菌介导植物遗传转化的影响因素影响农杆菌介导的植物遗传转化效率的条件是多方面的。一方面外植体的类型、载体质粒、细菌菌株、培养基及组成等不同，转化结果也不尽相同，另一方面，农杆菌的侵染浓度、侵染时间、预培养和共培养条件甚至后期筛选中所用抗生素的浓度都会对农杆菌的侵染效率产生影响[44-47]。部分化学品在转化过程中的使用也会提高转化的效率[48]。一些表面活性剂可以通过降低表面张力来能帮助农杆菌更加有效的附着到植物细胞或组织上，有助于侵染效率的提高[49]。1.农杆菌浓度和侵染时间对愈伤生长和分化的影响以 600 nm 的吸光值为标准测定农杆菌菌液的浓度，此时农杆菌活力较强，处于生长对数时期，菌液的浓度不同会造成不同的侵染效果。侵染菌液 OD600值介于0.5-0.8 为最适的侵染浓度，由于此时农杆菌的活性强，易于转化进入受体宿主细胞，
【参考文献】：
期刊论文
[1]根癌农杆菌介导遗传转化烟草‘NC89’效率的影响因素（英文）[J]. MALEKI Samaneh Sadat,MOHAMMADI Kourosh,季孔庶. 南京林业大学学报(自然科学版). 2018(01)
[2]小麦转基因技术研究及其应用[J]. 陈志忠. 乡村科技. 2018(01)
[3]农杆菌介导的小麦成熟胚遗传转化影响因素分析[J]. 彭亚博,田保明,崔明珠,师恭曜,李瑞,位芳,曹刚强. 麦类作物学报. 2017(04)
[4]农杆菌介导的烟草瞬时表达试验条件优化[J]. 霍琳,及晓宇,王玉成. 分子植物育种. 2016(01)
[5]农杆菌介导的植物遗传转化影响因素研究进展[J]. 孙华军,李国瑞,陈永胜,黄凤兰,李跃,邢超,赵永,陈晓凤,包长春,张智勇. 安徽农业科学. 2015(24)
[6]农杆菌介导的玉米愈伤组织遗传转化影响因子和植株再生条件[J]. 张莹莹,吴连成,张赛赛,安允权,崔新建,陈彦惠. 江苏农业科学. 2014(11)
[7]农杆菌介导的橡胶草遗传转化体系的建立[J]. 袁彬青,王秀珍,罗成华,闫洁,祝建波. 西北农业学报. 2014(09)
[8]农杆菌介导果树遗传转化因素分析研究进展[J]. 尚霄丽. 特种经济动植物. 2014(05)
[9]乙酰丁香酮及共培养pH对黄瓜遗传转化效率的影响[J]. 宁宇,李蕾,苗永美,李季,陈劲枫. 中国瓜菜. 2013(05)
[10]基于农杆菌介导的小麦遗传转化体系的影响因素的分析[J]. 赵芳方,田保明,位芳. 安徽农业科学. 2013(19)
硕士论文
[1]农杆菌介导丹东蒲公英遗传转化研究[D]. 刘越.沈阳农业大学 2018
[2]农杆菌介导小麦遗传转化体系的优化及盐生草耐盐基因在拟南芥中的功能验证[D]. 闫栋.甘肃农业大学 2018
[3]黄瓜离体再生和遗传转化体系的建立[D]. 张若纬.中国农业科学院 2010
[4]多胺和表面活性剂对欧美杨107转化的影响及sePEAMT、seCMO共表达载体构建[D]. 祖勇.大连理工大学 2008
本文编号：3351323
【文章来源】：聊城大学山东省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
诱导表达的双组分系统
件的 pMDC150 和含有响应元件的 pMDC160。主要作用原理为：激活元件中的 35S启动子启动 XVE 基因表达并产生转录激活因子，用 17β-雌二醇进行诱导后，转录激活因子 XVE 会结合 OlexA-TATA 启动子，进而启动下游 GUS 基因的表达[35]。图 1-1 诱导表达的双组分系统[35]Figure 1-1 Two-component system for inducing expression
图 1-3 农杆菌介导的遗传转化模型[43]Figure 1-3 Agrobacterium-mediated genetic transformation model1.3.2 农杆菌介导植物遗传转化的影响因素影响农杆菌介导的植物遗传转化效率的条件是多方面的。一方面外植体的类型、载体质粒、细菌菌株、培养基及组成等不同，转化结果也不尽相同，另一方面，农杆菌的侵染浓度、侵染时间、预培养和共培养条件甚至后期筛选中所用抗生素的浓度都会对农杆菌的侵染效率产生影响[44-47]。部分化学品在转化过程中的使用也会提高转化的效率[48]。一些表面活性剂可以通过降低表面张力来能帮助农杆菌更加有效的附着到植物细胞或组织上，有助于侵染效率的提高[49]。1.农杆菌浓度和侵染时间对愈伤生长和分化的影响以 600 nm 的吸光值为标准测定农杆菌菌液的浓度，此时农杆菌活力较强，处于生长对数时期，菌液的浓度不同会造成不同的侵染效果。侵染菌液 OD600值介于0.5-0.8 为最适的侵染浓度，由于此时农杆菌的活性强，易于转化进入受体宿主细胞，
【参考文献】：
期刊论文
[1]根癌农杆菌介导遗传转化烟草‘NC89’效率的影响因素（英文）[J]. MALEKI Samaneh Sadat,MOHAMMADI Kourosh,季孔庶. 南京林业大学学报(自然科学版). 2018(01)
[2]小麦转基因技术研究及其应用[J]. 陈志忠. 乡村科技. 2018(01)
[3]农杆菌介导的小麦成熟胚遗传转化影响因素分析[J]. 彭亚博,田保明,崔明珠,师恭曜,李瑞,位芳,曹刚强. 麦类作物学报. 2017(04)
[4]农杆菌介导的烟草瞬时表达试验条件优化[J]. 霍琳,及晓宇,王玉成. 分子植物育种. 2016(01)
[5]农杆菌介导的植物遗传转化影响因素研究进展[J]. 孙华军,李国瑞,陈永胜,黄凤兰,李跃,邢超,赵永,陈晓凤,包长春,张智勇. 安徽农业科学. 2015(24)
[6]农杆菌介导的玉米愈伤组织遗传转化影响因子和植株再生条件[J]. 张莹莹,吴连成,张赛赛,安允权,崔新建,陈彦惠. 江苏农业科学. 2014(11)
[7]农杆菌介导的橡胶草遗传转化体系的建立[J]. 袁彬青,王秀珍,罗成华,闫洁,祝建波. 西北农业学报. 2014(09)
[8]农杆菌介导果树遗传转化因素分析研究进展[J]. 尚霄丽. 特种经济动植物. 2014(05)
[9]乙酰丁香酮及共培养pH对黄瓜遗传转化效率的影响[J]. 宁宇,李蕾,苗永美,李季,陈劲枫. 中国瓜菜. 2013(05)
[10]基于农杆菌介导的小麦遗传转化体系的影响因素的分析[J]. 赵芳方,田保明,位芳. 安徽农业科学. 2013(19)
硕士论文
[1]农杆菌介导丹东蒲公英遗传转化研究[D]. 刘越.沈阳农业大学 2018
[2]农杆菌介导小麦遗传转化体系的优化及盐生草耐盐基因在拟南芥中的功能验证[D]. 闫栋.甘肃农业大学 2018
[3]黄瓜离体再生和遗传转化体系的建立[D]. 张若纬.中国农业科学院 2010
[4]多胺和表面活性剂对欧美杨107转化的影响及sePEAMT、seCMO共表达载体构建[D]. 祖勇.大连理工大学 2008
本文编号：3351323
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