I-B-Svi型CRISPR-Cas3系统在哺乳动物细胞中的基因编辑

发布时间：2021-08-21 07:03

　　CRISPR/Cas系统是细菌和古生菌在长期进化过程中所产生的抵抗外源核酸入侵的免疫系统。该系统可以由人工设计的gRNA与Cas蛋白复合对目标DNA进行切割,设计模版tDNA通过宿主细胞中自身HDR系统修复获得所需基因编辑。本论文旨在利用自行分离、鉴定、命名、并已证明能在原核及真核微生物中可对基因组中基因进行自打靶以及非自打靶基因的I-B-Svi CRISPR-Cas3系统对HEK293T和NIH3T3细胞中的靶DNA序列进行编辑改造。作为靶细胞研究的人胚肾细胞HEK293T和鼠NIH3T3细胞是模式哺乳细胞,具有生长较快、易转染培养,且适合胞内表达之特点。实验首先用非碱基优化的Type I-B-Svi CRISPR/Cas3系统和商业化的CRISPR/Cas9系统的基因编辑工具探索并掌握了哺乳细胞中的编辑操作。在293T细胞中的drosha基因（靶标:Exon4）和3T3细胞中的vegfa基因的（靶标:Exonl）基因编辑中,分别设计了基于hcas3的g-drosha和与靶标位点两侧具有同源臂序列的t-drosha::egfp和基于scas3和hcas9的g-vegfa和与靶标位点两... 

【文章来源】：安徽大学安徽省 211工程院校

【文章页数】：102 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ基因编辑系统机制图??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ?ｇｅｎｅ?ｅｄｉｔｉｎｇ?ｓｙｓｔｅｍ??

?Ｔａｒｇｅｔ＾ｌｅａｖａｇｅ?■?ｇｅｎｏｍｅ??图１－１?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ基因编辑系统机制图??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ?ｇｅｎｅ?ｅｄｉｔｉｎｇ?ｓｙｓｔｅｍ??１．２?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系统在细胞中的应用??与其他形式的基因编辑工具相比，ＣＲＩＳＰＲ?／?Ｃａｓ基因编辑工具使得细胞中??ＤＮＡ的靶向变得更容易。这项革命性的技术为研宂基因功能提供了绝佳的机会，??２??

正是由于ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系统前景良好的应用价值，使得该系统成为时下较??为热门的研究领域，但来源于不同生物的ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系统应用前景不同，因??此进一步拓展和开发ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系统在生物领域具有巨大价值。??１．３?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系统的分类??ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系统根据Ｃａｓ蛋白的不同主要分为２大类，其中１类目前主要??分为三型（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ?ｔｙｐｅｓ?１，丨丨１，ａｎｄ?ＩＶ?）?［２４］在自然界中分布较广主要存在于??细菌和古细菌中，１类ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系统中常见多个Ｃａｓ效应蛋白，但具体作??用机制仍不清晰。２类目前也分为三型（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ?ｔｙｐｅｓ?ＩＩ，Ｖ，?ａｎｄ?Ｖ丨）［２；＞］主??要存在于细菌中，其分布不如１类，２类ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系统中主要为单Ｃａｓ效??应蛋白，是目前研宄较为广泛的一类ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系统。??

【参考文献】：
期刊论文
[1]新一代基因组编辑系统CRISPR/Cpf1[J]. 杨帆,李寅.  生物工程学报. 2017(03)

硕士论文
[1]维吉尼亚链霉菌IBL14中sviscsn基因簇功能分析[D]. 许鑫.安徽大学 2017
[2]维吉尼亚链霉菌IBL14中I-B-svi型CRISPR-Cas系统及青霉素代谢相关酶基因自敲除[D]. 邱彩花.安徽大学 2017
[3]维吉尼亚链霉菌IBL14中的CRISPR-Cas系统及其基因编辑方法[D]. 雍德祥.安徽大学 2016



本文编号：3355119