基于酰基-生物素交换的棕榈酰化修饰蛋白质组分析方法学研究

发布时间：2021-09-01 23:18

　　蛋白质棕榈酰化修饰是一种可逆的翻译后修饰,在调节蛋白质间相互作用、蛋白质的膜定位及细胞内信号传导等过程中起着关键作用,同时心脏组织中的G蛋白偶联受体（GPCR）、跨膜钠/钾泵和电压门控钠通道等蛋白质均受到棕榈酰化修饰的调节。利用酰基-生物素置换法（Acyl-biotinyl exchange,ABE）对棕榈酰化蛋白质的检测已经日益成熟,但是已有研究主要集中于神经系统,对心脏组织中的相关修饰研究较少。因此本研究利用ABE方法对心脏组织中的棕榈酰化修饰蛋白质进行检测及质谱鉴定,并对ABE方法进行优化,进一步提高检测效率。在本研究中,采用生物素化试剂Biotin-HPDP对小鼠心脏组织中的棕榈酰化蛋白质进行标记,成功鉴定出50个棕榈酰化修饰的蛋白质。此外,建立了基于多肽水平的ABE方法,对棕榈酰化蛋白质进行快速标记。在这一方法中,通过将多肽样品吸附至固相萃取柱,使反应缓冲液流过柱子并与吸附在柱上的多肽样品反应,在每一步反应后仅通过洗涤柱子便可以达到去除残余试剂的目的,这一方法简化了操作步骤,大大的缩短了实验时间。本研究中确定最优实验条件是酶解为多肽后使用10 mmol/L N-乙基马来酰亚胺... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

蛋白质动态棕榈酰化修饰过程

淀法对样品损失的影响应后的蛋白样品经 3 次 CM 沉淀除去未反应的 Biotin-H 3 次沉淀后溶解的蛋白样品各 10μL，加入不含有还S-PAGE 电泳，随后对其进行转膜，转膜结束后，用 Str的棕榈酰化蛋白质进行识别。从图 2.2 可以看出，随色越来越浅，即蛋白含量越来越少，说明沉淀次数对

图 2.1 Western blot 方法验证酰基生物素置换法（ABE）的可行性 蛋白沉淀法对样品损失的影响ABE 反应后的蛋白样品经 3 次 CM 沉淀除去未反应的 Biotin-HPDP的样品及 3 次沉淀后溶解的蛋白样品各 10μL，加入不含有还原剂进行 SDS-PAGE 电泳，随后对其进行转膜，转膜结束后，用 Streptav物素标记的棕榈酰化蛋白质进行识别。从图 2.2 可以看出，随着沉

【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋白质棕榈酰化修饰的分析方法进展[J]. 方彩云,张晓勤,陆豪杰.  分析化学. 2014(04)



本文编号：3377835