基于DNA链置换反应动力学和GFET对DNA甲基化的检测
发布时间：2021-09-04 01:29
DN A甲基化,作为新型的生物检测标志物,在人类疾病检测和预后方面展示出巨大的应用潜能。现已研发了传统检测和生物传感器等方法实现了对DNA甲基化水平的检测,但是上述检测技术由于设备昂贵或操作过程繁琐等缺陷,限制了它们在临床诊断上的应用。石墨烯,因其优良的导电性,已广泛应用于传感领域,尤其是以单层石墨烯为通道的场效应制备的晶体管（GFET）,因检测灵敏度高,己实现了对多种生物分子的检测。到目前为止,仍缺少关于利用GFET对DN A甲基化水平检测的研究。因此,在本研究中,我们主要是开发一种基于GFET无标的检测方法实现对DN A甲基化的检测。本研究中,我们选取谷胱甘肽巯基转移酶（GSTP1）启动子区域中中的一段序列,将该序列中的胞嘧啶进行不同数目和不同位点的甲基化修饰后,作为本实验的目的序列。首先,为了 了解不同甲基化水平修饰的目的序列与DN A探针反应的动力学,我们利用实时荧光定量PCR技术,对不同甲基化修饰水平的目的序列与DNA探针的杂交过程进行系统的分析:同时利用荧光淬灭原理,观测不同甲基化修饰水平的序列对DN A探针链置换反应速率的影响。结果表明:无论足与DN A探针的杂交还是链置...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：88 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２?甲基化异常对ＤＮＡ转录的影响??Ｆｉｇ．２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ａｂｎｏｒｍａｌ?ｍｃｔｈｙｌａｔｉｏｎ?ｏｎ?ＤＮＡ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ??注：图片引自参务文献１５
异位点的过甲基化是癌细胞的两个重要特征。低甲基化主要是导致了细胞内原癌??基因的异常激活、印迹基因的缺失或者基因组的不稳定而引发了癌症的发生；过??甲基化主要是导致了抑癌基因和ＤＮＡ修复基因的失活而引发了癌症（图３?）Ｕ６－３７］。??闪此，人们Ｌｉ经将ＤＮＡ甲基化的水平用于癌症的筛查、分类、预后和癌症治疗??监测等领域。??Ｃｅｎｔｒｏｍｅｒｅ?９?ｔ?ｔ?＊?卜??肴?Ｉ?１?｜?Ｉ?１?Ｉ?１?，?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ???／／???＾一＾??ＬＬＬＬ＾?ＴＳＧ?；???Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ?七」?ＣｐＧ?ｉｓｌａｎｄ??ｐｅｒｉｃｅｎｔｒｏｍｅｒｉｃ?（ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ）??ｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｔｉｎ??Ｉ?Ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ?Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ??▼?＾??Ｍｉｔｏｔｉｃ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，?Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ?ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ，??ｇｅｎｏｍｉｃ?ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｌｏｓｓ?ｏｆ?ＴＳＧ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??？?ＤＮＡ?ｔｅｐｅａ！?＇?．??Ｉ?Ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ??丽?Ｕｎｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ??图３?ｄｎａ序列的过甲基化和去甲基化与癌症引发的关系??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?Ｉ）Ｎ八（ｌｉｙｐｏ／ｈｙｐｃｉ．）?ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ?ａｎｄ?ｈｕｍａｎ?ｃａｎｃｅｒ??注：屬片闢自参芩殳献１６。??Ｈ的
１．３?传统方式对ＤＮＡ甲基化的检测??在过去的２０年里，人们己经开发出多种用于检测生物组织或者体液中ＤＮＡ??甲基化水平的技术［５”，所有的方法均需要通过以下三个步骤来完成（图４）。简??介如下：首先，通过亚硫酸氢钠转化法＿、中基敏感型限制性内切酶酶切法和特异??性亲和吸附纯化等三种方法实现ＤＮＡ甲基化序列的分离。其中亚硫酸氢钠转化??法使用的最为广泛，该种方法主要是依赖于亚硫酸氢钠能够将Ｃ转化成尿嘧啶??（Ｕ）
本文编号：3382278
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：88 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２?甲基化异常对ＤＮＡ转录的影响??Ｆｉｇ．２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ａｂｎｏｒｍａｌ?ｍｃｔｈｙｌａｔｉｏｎ?ｏｎ?ＤＮＡ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ??注：图片引自参务文献１５
异位点的过甲基化是癌细胞的两个重要特征。低甲基化主要是导致了细胞内原癌??基因的异常激活、印迹基因的缺失或者基因组的不稳定而引发了癌症的发生；过??甲基化主要是导致了抑癌基因和ＤＮＡ修复基因的失活而引发了癌症（图３?）Ｕ６－３７］。??闪此，人们Ｌｉ经将ＤＮＡ甲基化的水平用于癌症的筛查、分类、预后和癌症治疗??监测等领域。??Ｃｅｎｔｒｏｍｅｒｅ?９?ｔ?ｔ?＊?卜??肴?Ｉ?１?｜?Ｉ?１?Ｉ?１?，?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ???／／???＾一＾??ＬＬＬＬ＾?ＴＳＧ?；???Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ?七」?ＣｐＧ?ｉｓｌａｎｄ??ｐｅｒｉｃｅｎｔｒｏｍｅｒｉｃ?（ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ）??ｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｔｉｎ??Ｉ?Ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ?Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ??▼?＾??Ｍｉｔｏｔｉｃ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，?Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ?ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ，??ｇｅｎｏｍｉｃ?ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｌｏｓｓ?ｏｆ?ＴＳＧ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??？?ＤＮＡ?ｔｅｐｅａ！?＇?．??Ｉ?Ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ??丽?Ｕｎｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ??图３?ｄｎａ序列的过甲基化和去甲基化与癌症引发的关系??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?Ｉ）Ｎ八（ｌｉｙｐｏ／ｈｙｐｃｉ．）?ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ?ａｎｄ?ｈｕｍａｎ?ｃａｎｃｅｒ??注：屬片闢自参芩殳献１６。??Ｈ的
１．３?传统方式对ＤＮＡ甲基化的检测??在过去的２０年里，人们己经开发出多种用于检测生物组织或者体液中ＤＮＡ??甲基化水平的技术［５”，所有的方法均需要通过以下三个步骤来完成（图４）。简??介如下：首先，通过亚硫酸氢钠转化法＿、中基敏感型限制性内切酶酶切法和特异??性亲和吸附纯化等三种方法实现ＤＮＡ甲基化序列的分离。其中亚硫酸氢钠转化??法使用的最为广泛，该种方法主要是依赖于亚硫酸氢钠能够将Ｃ转化成尿嘧啶??（Ｕ）
本文编号：3382278
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3382278.html
教材专著
