裂殖酵母Clr1蛋白在DNA损伤应答中的分子机制探究

发布时间：2021-09-04 14:42

　　DNA损伤应答是机体应对损伤作出的一系列反应。DNA损伤应答有效的协调,在机体适应环境、细胞的分裂、分化过程中发挥了重要作用。研究DNA损伤应答相关的分子机制,将会加深对人类许多疾病发生发展机制的理解,为疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。本课题以裂殖酵母（Fission yeast,S.pombe）为模式生物,研究真核生物中DNA损伤应答相关机制,通过遗传筛选方法寻找参与DNA损伤应答新的蛋白。ATR/Rad3蛋白是目前已知DNA损伤应答中至关重要的一个上游蛋白激酶,它参与了DNA损伤应答多方面的调控。在Rad3基因缺失的背景下,筛选出对DNA损伤药物敏感表型产生回补的突变株,再通过对突变株深度测序确定相关突变基因,其中一个可能参与DNA损伤应答反应的新基因为Clr1。Clr1蛋白是一个转录负调控蛋白,已报导的主要功能是参与异染色质的组装。本研究通过遗传实验,初步证明了Clr1蛋白与DNA损伤应答具有相关性,且Clr1缺失可以回补Rad3基因缺失对DNA损伤药物的敏感性。通过生化实验,证明在损伤应答反应时,Clr1蛋白会受到Rad3蛋白的调控,再通过泛素化途径降解。但Clr1作为Ra... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

遗筛选流程图

重庆医科大学硕士研究生学位论文3.2 Clr1 缺失可以回补 Rad3 缺失对 DNA 损伤药物的敏感性为了验证遗传筛选中得到的 Clr1 基因的表型，在野生型和 Rad3 基因缺失的遗传背景下，同时将 Clr1 基因敲除，进行 DNA 损伤药物敏感性检测。YES 培养板板作为酵母数量的对照，在 YES 平板中加入可以导致 DNA 损伤的药物 CPT。实验结果如图（图 2）所示，在 30℃培养 5 天后，Rad3 缺失菌株对 DNA 损伤药物表现的非常敏感，而 Clr1 与 Rad3 基因双缺菌株降低了对 DNA 损伤药物的敏感。结果提示，在遗传学背景下，Clr1 与 Rad3 基因具有相关性，Clr1 基因可能参与到Rad3 调控的通路中。提出假设机体在遭受 DNA 损伤后， Rad3 蛋白激酶被激活，可能调控下游 Clr1 蛋白，使 Clr1 蛋白减少，进行一系列效应反应，对 DNA 损伤做出应答。

图 3 药物 理后 Clr1 蛋白表达变化Figure 3 Clr1 protein expression changed after drug treatment DNA 损伤应答反应中 Clr1 蛋白通过蛋白酶体途径降解前面结果显示，在 DNA 损伤药物处理后，Clr1 蛋白量减少，紧随着便提出问Clr1 是如何或通过什么途径减少的？有许多文献报导，在 DNA 损伤应答中，蛋白在被激酶磷酸化激活之后，接着会被泛素化，然后通过蛋白酶体途径而。于是便猜想，在 DNA 损伤应答过程中，Clr1 蛋白是否受到 rad3 的磷酸化，接着被泛素化通过蛋白酶体途径而降解，从而促进机体的损伤的修复？带着与猜想，首先验证 Clr1 蛋白如何减少，MG132 是文献已报道的蛋白酶体抑制它可以抑制蛋白酶体，从而抑制蛋白的降解[17]。从（图 4）结果来看，用野生型和 Rad3 突变株进行对照，然后对细胞同时加


本文编号：3383457