基因工程表达内含肽介导的抗菌肽（MME）及其酰胺化

发布时间：2021-09-05 18:57

　　【目的】探讨在巯乙基磺酸钠（MESNa）与碳酸氢铵（NH₄HCO₃）存在下,对在大肠杆菌上表达的重组融合蛋白中内含肽（Intein）用硫醇（DTT）进行自剪切,促使抗菌肽（MME）碳末端实现酰胺化。【方法】构建用大肠杆菌表达内含肽介导的MME重组质粒,通过表达获得依次由"组氨酸、Sumo标签、MME、内含肽"构成的融合蛋白,用镍柱及透析进行纯化,在MESNa和NH₄HCO₃存在下,用DTT对内含肽进行自剪切,促使MME碳末端酰胺化,肠激酶切割、纯化,得到碳末端酰胺化的MME。质谱和二级串联质谱配合使用,检测MME及其碳末端酰胺化。【结果】通过PCR,鉴定融合蛋白,其基因片段为837 bp,符合预期。质谱鉴定得MME相对分子量为3 057.7与其理论值3 057.64一致。二级串联质谱检测得MME碳端碎片的分子量为1 214.728,与碳末端酰胺化的MME碳端碎片理论分子量1 214.739相符,匹配度为45,表明本研究制备的MME碳末端已被酰胺化,该蛋白为可溶。【结论】用大肠杆菌成功地表达了重组融合... 

【文章来源】：福建农业学报. 2020,35(11)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3385901