木聚糖酶基因（XynB）肠道特异表达载体的构建及鉴定

发布时间：2021-09-09 18:43

　　将黑曲霉属XynB基因和猪RELMβ基因核心启动子区克隆到pcDNA3.1（-）中,构建携带绿色荧光和Myc双标记的肠道特异表达载体pcDNA3.1-RELMβ-XynB-Myc-GFP。利用脂质体介导将载体转染人结肠癌细胞（HT29）和人肝癌细胞（Bel7402）,荧光显微镜检测发现,该载体可在HT29细胞特异表达绿色荧光蛋白;对转染该表达载体的HT29细胞进行RT-PCR检测和WB分析,结果表明,XynB基因在HT29细胞中正常转录,并且在细胞内检测到目的蛋白表达。 

【文章来源】：江苏农业科学. 2020,48(11)

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌种和质粒
        1.1.2 主要试剂和工具酶
    1.2 方法
        1.2.1 真核表达载体pcDNA3.1-XynB-Myc的构建
        1.2.2 pcDNA3.1-XynB-Myc-GFP的构建
        1.2.3 猪RELMβ基因启动子指导的肠道特异表达载体构建
        1.2.4 XynB在HT29细胞的特异表达
        1.2.5 XynB基因在HT29细胞中的表达鉴定
2 结果与分析
    2.1 真核表达载体pcDNA3.1-XynB-Myc的构建
    2.2 载体pcDNA3.1-XynB-Myc-GFP的构建
    2.3 肠道特异表达载体pcDNA3.1-RELMβ-XynB-Myc-GFP构建
    2.4 XynB在HT29细胞中的特异表达
    2.5 XynB基因在HT29细胞表达鉴定
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪RELMβ基因启动子区克隆及序列分析[J]. 陈哲,雷明明,于建宁,王公金,施振旦.  江苏农业学报. 2015(05)
[2]木聚糖酶-甘露聚糖酶融合酶基因Linker优化及其在猪肾pK15细胞中共表达[J]. 张献伟,张冠冠,吴珍芳,孟繁明,刘德武,张茂,许卫华,郑恩琴,贺晓燕,李真,李紫聪.  中国农业科学. 2013(22)
[3]IGF-1毛囊特异表达载体的构建以及转染绒山羊胎儿成纤维细胞的研究[J]. 郭旭东,尹俊,杨东山,毛舒燕,宝明涛,旭日干.  畜牧兽医学报. 2009(10)
[4]绵羊毛发角蛋白结合蛋白启动子的克隆与活性分析[J]. 王春生,安铁洙,白秀娟,任洪林,柳增善.  中国兽医学报. 2008(02)
[5]黑曲霉产木聚糖酶稳定性的研究[J]. 聂国兴,王修启,明红,李春喜,李用芳,周洪琪.  华北农学报. 2004(01)



本文编号：3392592