菊糖蔗糖酶和β-半乳糖苷酶的鉴定及其性质研究

发布时间：2021-09-19 02:04

　　果聚糖是广泛应用于食品、保健品和制药工业中的功能性多糖。目前,获得果聚糖的方法有两种,一种是植物来源,另一种是微生物来源的酶直接合成。细菌来源的合成果聚糖的酶有两种,菊糖蔗糖酶（EC 2.4.1.9）和果聚糖蔗糖酶（EC 2.4.1.10）。其中,菊糖蔗糖酶的研究很少,酶学特性和晶体结构信息都不是很清楚。为了获得催化效率较好的菊糖蔗糖酶,本文从CAZy数据库中筛选了一段来源于Brevibacillus formosus的糖苷水解酶。通过对B.formosus来源的糖苷水解酶序列进行分析,该序列与Bacillus korlensis（WP₀660521 62.1）来源的果聚糖蔗糖酶相似性为78.55%,与Bacillus agaradhaerens WDG185（ATN45518.1）来源的菊糖蔗糖酶的相似性为72.01%,将其命名为Inu-Bfor。通过大肠杆菌表达系统获得了高表达量的可溶性蛋白（蛋白含量约为1.5 mg/mL）,并进行了酶学性质的研究。Inu-Bfor最适温度为35℃,具有极好的热稳定性,45℃条件下的半衰期为34 h。最适pH为6.0,pH5.... 

【文章来源】：安徽大学安徽省 211工程院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１葡萄糖标准曲线??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｇｒａｐｈ?ｏｆ?ｇｌｕｃｏｓｅ??－？［７３］

催化水解蔗糖生成１?Ｍｍｏｌ葡萄糖所需要的酶量为１个Ｕ。??以葡萄糖浓度作为横坐标，对应的〇Ｄ５４〇作为纵坐标，绘制出葡萄糖标准??曲线图２－１。标准曲线方程为Ｙ＝０．００５５Ｘ－０．２２４３，Ｒ２＝０．９９８。其中Ｙ为ＯＤ５４０??的吸光值，Ｘ为体系中葡萄糖的浓度Ｏｉｇ／＾Ｌ）。??０．８－１??０＿７?－?Ｙ＝０．?００５５Ｘ－０．?２５４３?ｙ??ｎ，?Ｒ＾Ｏ．?９９８?Ｚ??０?０．５－?Ｘ??ｉ?０－４－??０．３－?Ｘ??０．２－??０？１??８０?１００?１２０?１４０?１６０?１８０?２００??Ｃ＞?Ｉｎ?ｃｏｓｅ?（ｔｉｇ／ｕ?Ｌ）??图２－１葡萄糖标准曲线??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｇｒａｐｈ?ｏｆ?ｇｌｕｃｏｓｅ??Ｉｎｕ－Ｂｆｏｔ？蛋白浓度使用Ｂｒａｄｆｏｒｄ法［７３］进行测定，该方法是以牛血清蛋白浓??度作为横坐标，〇Ｄ５９５作为纵坐标绘制出标准蛋白浓度的标准曲线如图２－２，标??准曲线方程为Ｙ＝?０．００４７Ｘ?＋?０．０９２

估测抽提质粒的浓度后再将ｐＥＴ－２８ａ（＋；）－ＩｎＵ－Ｂｆ〇ｒ重组质粒转化至??￡．ｃｏ／／ＢＬ２１（ＤＥ３）感受态细胞中，在平板上挑取数个单菌落，进行培养。再用??双酶切方法验证阳性克隆，双酶切结果如下图２＞４所示，Ｉｎｕ－Ｂｆｏｉ？基因片段大??小为１２６９?ｂｐ，与图中箭头所指条带位置一致。将培养至生长期的菌液保藏于??１５％甘油中

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3400786