通过抑制PDHK3的表达降低乳酸水平增加CHO细胞抗体表达量

发布时间：2021-09-23 10:41

　　目的:通过抑制乳酸产生相关基因丙酮酸脱氢酶激酶3（PDHK3）的表达,降低CHO细胞系的乳酸表达,增加CHO细胞系蛋白表达量。方法:针对PDHK3序列设计特定的shRNA质粒,在CHO细胞系构建过程中将含有此shRNA的质粒与表达抗体蛋白的质粒一同转染至宿主细胞中,经过抗生素筛选后进行批次补料生产抗体蛋白。测定乳酸及蛋白产量,同时检测PDHK3基因的mRNA表达水平及shRNA质粒中的neomycin基因拷贝数。结果:利用此方法分别转染的不同抗体蛋白分子,PDHK3基因的mRNA水平降低了65.0%～76.0%,批次补料过程乳酸含量显著降低,同时相应的抗体蛋白表达量提升了18.6%～233.0%。结论:利用shRNA方法抑制乳酸相关的PDHK3基因的表达,可以有效降低乳酸表达,同时提高目的蛋白的表达。 

【文章来源】：生物化工. 2020,6(03)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

Neomycin基因拷贝数

4个分子（mAb1～mAb4）的实验组和对照组2转染的质粒中均含有Neomycin基因，拷贝数为4～9，见图4。由拷贝数检测实验可知，PDHK3-shRNA在转染过程及批次补料过程均有基因表达。图2 乳酸表达量曲线

乳酸表达量曲线


本文编号：3405560