棕榈酰转移酶ZDHHC5调控NOD1的棕榈酰化修饰对细菌性免疫的重要作用

发布时间：2021-09-24 14:01

　　先天性免疫反应是宿主细胞应对外源刺激物和病原菌入侵的第一道防线,这种特异性反应依赖于广泛分布在细胞膜和细胞质的模式识别受体（Pattern Recognize Receptors,PRRs）。目前已发现的模式识别受体主要包括Toll样受体（Toll-like receptors）、NOD样受体（NOD-like receptors）、RIG样受体（RIG-like receptors）。PRRs识别病原成分后,可启始炎症信号转导通路,如NF-kB,MAPK信号通路,从而促进白细胞介素,趋化因子等炎症因子的释放。NOD1和NOD2蛋白均为NOD样受体家族成员,是细胞质中参与先天性免疫反应的关键模式识别受体,在病原菌感染所致的炎症反应和自发性免疫疾病的发生中有重要作用,阅读框移码突变体可导致克罗恩肠病。NOD1/2蛋白的质膜定位对于其起始炎症反应的功能不可或缺,有研究发现病原体被吞噬后,NOD1或NOD2蛋白能够定位质膜及于包含病原菌的内体膜,SLC转运体家族蛋白SLC15A3将脂多糖成分从内体转运至胞质从而介导继发性炎症信号通路激活。然而NOD1/2的膜定位机制尚未完全被阐明。迄今未发现... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

不同细胞中,瞬时过表达NOD1蛋白具有细胞质膜定位。

为了验证NOD1的质膜定位不是由于过表达造成的蛋白积累。我们想进一步检测了人外周血单核细胞(Peripheral blood monolclear cell,PBMC)并分化为巨噬细胞(h MDM),小鼠骨髓分离巨噬细胞(Mouse Bone marrow derived macrophage,m BMDM),并验证内源NOD1蛋白的亚细胞定位。首先,我们在HEK293细胞中过表达GFP.NOD1后,NOD1抗体的免疫荧光显示有很好的共定位,因此验证了NOD1抗体的特异性(图2A)。在h MDM和m BMDM中,免疫荧光结果同样显示出内源NOD1有较好的质膜定位特性(图2B)。另外,我们想要采用生化手段验证NOD1的亚细胞定位。我们利用细胞组分分离试剂盒对人外周血单核细胞(THP1)和人永生化角质形成细胞(Hacat)进行膜质分离。Western Blot分析质膜成分中NOD1表达水平,结果表明在THP1细胞(图3A)质膜组分和Hecat细胞(图3B)质膜组分中均能够检测到内源NOD1蛋白。

另外,我们想要采用生化手段验证NOD1的亚细胞定位。我们利用细胞组分分离试剂盒对人外周血单核细胞(THP1)和人永生化角质形成细胞(Hacat)进行膜质分离。Western Blot分析质膜成分中NOD1表达水平,结果表明在THP1细胞(图3A)质膜组分和Hecat细胞(图3B)质膜组分中均能够检测到内源NOD1蛋白。3.2 NOD1蛋白能够发生棕榈酰化修饰


本文编号：3407883