三种培养原代支气管成纤维细胞方法的比较

发布时间：2021-09-25 16:53

　　目的探讨建立适用于SD大鼠支气管成纤维细胞原代培养的方法。方法取重量为150～180 g的SD雄性大鼠的支气管组织,采用Ⅰ型胶原酶、木瓜蛋白酶联合消化+组织块黏附法、胰酶+胶原酶联合消化（双酶消化法）+组织块黏附法、组织块黏附法进行原代支气管成纤维细胞的培养。利用镜下观察细胞的生长特点;免疫荧光染色法鉴定细胞的类型及纯度;细胞的增殖活性用CCK-8检测并绘制生长曲线。结果酶消化+组织块黏附法培养使细胞游出速度更快、细胞数量产生更多。组织块黏附法培养的细胞爬出相对缓慢、培养周期更长、获得的细胞数量相对较少。CCK8增殖曲线呈S形。培养48 h,经酶消化法分离得到的成纤维细胞已经游出,约有60%以上细胞已经贴壁,培养6～7 d可传代。组织块贴壁法培养5 d时,细胞开始从组织块边缘缓慢爬出,随后从组织块周围延伸长,14 d左右可传代。使用酶消化法培养的支气管成纤维细胞中可混有杂细胞团,为提高成纤维细胞的纯度可通过差速贴壁法纯化。结论双酶消化法+组织块黏附法可以更高效、快速的分离和获取支气管成纤维细胞,为研究慢性阻塞性肺疾病（COPD）气道重塑提供了充足的种子细胞。 

【文章来源】：中国老年学杂志. 2020,40(09)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

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酶消化法培养的原代支气管成纤维细胞(×200)

组织块贴壁法培养的原代支气管成纤维细胞(×200)

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3410096