小鼠胚胎干细胞诱导分化为胚胎睾丸支持样细胞方法和分子机理研究

发布时间：2021-10-09 11:09

　　胚胎睾丸支持细胞（embryonic Sertoli cells,eSCs）是雄性胚胎发育过程中形成的第一种雄性特异性细胞,对性别决定具有至关重要的作用,并且分泌多种营养物质,能够对其它种类细胞,如精原干细胞（spermatogonia stem cells,SSCs）起到支持扩增或分化等功能。因此,对胚胎睾丸支持细胞发育形成机理进行研究有助于揭示胚胎性腺发育和性别决定机制,为将来的临床应用提供指导作用。然而,采用常规的组织分离方法从小鼠雄性胚胎中难以大量提取胚胎睾丸支持细胞,阻碍了对胚胎睾丸支持细胞的基础理论研究和实验应用。因此,建立新的胚胎睾丸支持细胞的体外诱导获取方法具有重要意义。近年来,有研究添加维甲酸（retinoic acid,RA）和激活素A（ActivinA）等物质,诱导小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）分化形成中间中胚层（intermediate mesoderm,IM）来源细胞,再通过卵泡刺激素（follicle stimulating hormone,FSH）等蛋白因子化合物诱导胚胎睾丸支持样细胞（embryonic Sertol... 

【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：156 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．２睾丸支持细胞的形态结构＾??Ｆｉｇ．?１．２?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＳＣｓ??Ｅｐｓ：外质特化作用（ｅｃｔｏｐｌａｓｍｉｃ?ｓｐｅｃｉａｌｉｚａｔｉｏｎｓ）?；?ＭＶＢ：多泡体（ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ?ｂｏｄｉｅｓ）；??ＳＥＲ：光滑型内质网（ｓｍｏｏｔｈ?ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ?ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ?）；?ＲＥＲ：粗面型内质网（ｒｏｕｇｈ??ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ?ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ）?；?Ｇｌｙ：糖原颗粒（ｇｌｙ?

华东理工大学博士学位论文?第７页??ＧＡＴＡ４?ＩＨＣ??隨ｙ．ｅ綱??翁，：：姻??访巧夂‘：ｆ．：汔，：Ｊ??图１．３睾丸切片的形态结构Ｍ??Ｆｉｇ．?１．３?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｔｅｓｔｉｃｌｅ??图为小鼠睾丸组织石蜡切片，显示对生精小管进行横向切割的截面。ＧＡＴＡ４是一种睾丸支持细胞表??达的特异性标志物。图中箭头所指深褐色细胞为成熟睾丸支持细胞。蓝色为精原干细胞、间质细胞??和精子。比例尺＝３００?｜ｉｍ。ＩＨＣ：免疫组织化学法（ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）??大量聚集的成熟睾丸支持细胞在体外会形成“鱼贯状”趋势１４７１?（图１．４Ａ）。睾丸支??持细胞一般拥有一个主核仁和两个副核仁（图１．４Ｂ）。在电子显微镜下，可见睾丸支??持细胞的细胞膜上有许多凹陷和凸起，并时常有空泡和油脂滴形成的空洞（图１．４?Ｃ）。??细胞核膜上多皱褶，细胞核呈分叶状，并与长轴延伸方向一致。成熟睾丸支持细胞呈不??规则的高椎体形（ｈｉｇｈ?ｖｅｒｔｅｂｒａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ），细胞的基底部分附着基膜，而顶部则延伸??至曲细精小管的管腔［４８，６４〗。??睾丸支持细胞在不同发育阶段的特异性标志物（ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｂｉｏｍａｒｋｅｒ）会发生变化。??在胚胎和未成熟期的舉丸支持细胞中，高表达抗缪勒管激素（ａｎｔｉ?Ｍｕｌｌｅｒｉａｎ?ｈｏｒｍｏｎｅ，??ＡＭＨ，别名?ＭＩＳ）、ＧＡＴＡ?结合蛋白?４?（ＧＡＴＡｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ４，ＧＡＴＡ４）、肿瘤易感??基因?１?（Ｗｉｌｍｓ?ｔｕｍｏｒ?ｔｙｐｅ?１，ＷＴ１）、卵泡刺激素（ｆｏｌｌｉｃｌｅ?ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ?ｈｏ

第８页?华东理工大学博士学位论文??一种标志物，难以从动物组织中特异性地标记出睾丸支持细胞，需要通过几种标志物间??的交叉组合来进行鉴定。??．ａｉｎｎｕ＾ａｒＶ??ｗＡ４?／?＃?，？??一?．??＿??图１．４睾丸支持细胞的形态结构??Ｆｉｇ．?１．４?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＳＣｓ??实验对小鼠睾丸中提取的成熟小鼠睾丸支持细胞，通过光学显微镜和电子显微镜进行形态学鉴定。??（Ａ?）成熟小鼠胚胎睾丸支持细胞体外培养条件下成纺锤状伸展。??（Ｂ）成熟小鼠胚胎睾丸支持细胞具有多核结构，通常具有１个主核，以及１－２个复核。??（Ｃ）电子显微镜下可见成熟小鼠胚胎睾丸支持细胞表面具有大量皱褶和空洞存在。??１．２．２睾丸支持细胞的滋养功能??睾丸支持细胞作为雄性性腺支持细胞，能够分泌大量有利于其它细胞生存、扩增和??发育分化的活性蛋白因子。这些细胞因子主要分为四种类型：类固醇（ｓｔｅｒｏｉｄ）、生长??因子（ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ）、调节蛋白（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ?ｐｒｏｔｅｉｎ）和转运蛋白（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ）。??睾丸支持细胞分泌的类固醇主要是类固醇激素１；生长因子主要有激活素（ａｃｔｉｖｉｎ）??［７４】、转化生长因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ，?ＴＧＦ）、抑制素（ｉｎｈｉｂｉｎ）、胰岛素样??生长因子（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ，?ＩＧＦ）、生精生长因子（ｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ，??ＳＧＦ）、白介素?１?（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１，ＩＬ－１）和白介素?６?（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６，

【参考文献】：
期刊论文
[1]TRPC3 is required for the survival, pluripotency and neural differentiation of mouse embryonic stem cells（mESCs）[J]. Helen Baixia Hao,Sarah E.Webb,Jianbo Yue,Marc Moreau,Catherine Leclerc,Andrew L.Miller.  Science China（Life Sciences）. 2018(03)
[2]Percoll fractionation of adult mouse spermatogonia improvesgerm cell transplantation[J]. Kyu-Bom Koh,Masatoshi Komiyama,Yoshiro Toyama,Tetsuya Adachi,Chisato Mori.  Asian Journal of Andrology. 2004(02)



本文编号：3426249