体外负压培养对小鼠骨髓间充质干细胞增殖能力和血管内皮生长因子分泌水平的影响

发布时间：2021-10-12 17:54

　　背景:如何增强骨髓间充质干细胞增殖活性使其移植后发挥应有的疗效是目前急需解决的问题。目的:探讨体外负压培养技术对小鼠骨髓间充质干细胞增殖活性及血管内皮生长因子分泌水平的影响。方法:取第3代骨髓间充质干细胞,给予间歇性负压培养（-6.65,-13.3,-26.6 kPa）,2 h/次,1次/12 h,对照组在正常条件下培养。培养12,24,36,48,60 h,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,ELISA检测细胞分泌血管内皮生长因子水平,RT-PCR检测血管内皮生长因子受体mRNA表达。根据上述结果,选择一个最佳负压条件和时间（-26.6 kPa,24 h）,将骨髓间充质干细胞分为正常对照组、负压组、负压+血管内皮生长因子受体抑制剂Axitinib组,CCK-8法检测细胞增殖情况,EDU试剂盒检测EDU细胞阳性率,结晶紫染色观察细胞集落形成单位。结果与结论:①与对照组比较,3个负压干预组骨髓间充质干细胞显著增殖（P<0.05）;②与对照组比较,3个负压干预组细胞分泌血管内皮生长因子水平显著增高（P<0.05）,血管内皮生长因子受体mRNA表达显著增高（P<0.05）;③... 

【文章来源】：中国组织工程研究. 2020,24(01)北大核心

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【部分图文】：

图注：图中A为原代细胞培养第7天；B为第1代细胞培养12h；C为第3代细胞培养第3天；D为第3代细胞成骨诱导21d茜素红染色图1倒置显微镜观察骨髓间充质干细胞形态(×100)Figure1Morphologicalobservationofbonemarrowmesenchymalstemcellsunderinvertedmicroscope(×100)

图注：图中A为原代细胞培养第7天；B为第1代细胞培养12h；C为第3代细胞培养第3天；D为第3代细胞成骨诱导21d茜素红染色图1倒置显微镜观察骨髓间充质干细胞形态(×100)Figure1Morphologicalobservationofbonemarrowmesenchymalstemcellsunderinvertedmicroscope(×100)0h12h24h36h48h60h1.51.20.90.60.30空白对照组-6.65kPa组-13.3kPa组-26.6kPa组吸光度值图2负压干预后各组骨髓间充质干细胞增殖情况Figure2Proliferationofbonemarrowmesenchymalstemcellsineachgroupafternegativepressureintervention图注：图中A为负压干预后各组骨髓间充质干细胞培养上清液中血管内皮生长因子分泌水平；B为负压干预后各组骨髓间充质干细胞中血管内皮生长因子受体mRNA表达。与对照组比较，aP<0.05；与-6.65kPa组比较，bP<0.05；与-13.3kPa组比较，cP<0.05图3负压干预后各组骨髓间充质干细胞血管内皮生长因子水平及血管内皮生长因子受体mRNA表达Figure3Expressionofvascularendothelialgrowthfactoranditsreceptorinbonemarrowmesenchymalstemcellsundernegativepressure020040060080010001.51.00.50吸光度值(450nm)血管内皮生长因子水平(ng/L)图4各组负压培养后骨髓间充质干细胞分泌血管内皮生长因子水平与其增殖的线性关系Figure4Linearrelationshipbetweenthelevelofvascularendothelialgrowthfactorsecretedbybonemarrowmesenchymalstemcellsandtheirproliferationundernegativepressure对照组负压组

生长因子分泌水平；B为负压干预后各组骨髓间充质干细胞中血管内皮生长因子受体mRNA表达。与对照组比较，aP<0.05；与-6.65kPa组比较，bP<0.05；与-13.3kPa组比较，cP<0.05图3负压干预后各组骨髓间充质干细胞血管内皮生长因子水平及血管内皮生长因子受体mRNA表达Figure3Expressionofvascularendothelialgrowthfactoranditsreceptorinbonemarrowmesenchymalstemcellsundernegativepressure020040060080010001.51.00.50吸光度值(450nm)血管内皮生长因子水平(ng/L)图4各组负压培养后骨髓间充质干细胞分泌血管内皮生长因子水平与其增殖的线性关系Figure4Linearrelationshipbetweenthelevelofvascularendothelialgrowthfactorsecretedbybonemarrowmesenchymalstemcellsandtheirproliferationundernegativepressure对照组负压组负压+Axitinib组50403020100吸光度值(450nm)EDUDAPIMerge对照组负压组负压+Axitinib组1.51.00.50EDU阳性细胞率(%)P<0.05P<0.05P<0.05P<0.05对照组负压组负压+Axitinib组ABC图注：图中A为各组骨髓间充质干细胞增殖情况；B，C为各组EDU细胞阳性率和EDU标记情况(×100)图5血管内皮生长因子受体抑制剂Axitinib干预骨髓间充质干细胞在负压下培养后的细胞增殖以及EDU标记情况Figure5ProliferationandEDU-positivecellsofAxitinib-intervenedbonemarrowmesenchymalstemcellsundernegativepressure12h24h36h48h60h10008006004002000空白对照组-6.65kPa组-13.3kPa组-26.6kPa组血管内皮生

【参考文献】：
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本文编号：3433041