草果AtNCED基因克

发布时间：2021-10-23 15:11

　　9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶（9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase, NCED）是ABA生物合成的限速酶。诸多研究表明NCED基因表达量的变化与ABA含量显著相关,在种子休眠过程中发挥重要作用。为探究草果AtNCED基因的序列特征和功能,本研究以草果（Amomum tsaoko Crevost et Lemarie）种子转录组为基础,采用RT-PCR技术克隆了一个AtNCED基因。该基因全长2 372 bp,包含一个1 830 bp的开放阅读框（open reading frame, ORF）,编码610个氨基酸。生物信息学分析显示,AtNCED基因编码的蛋白在N-末端包含典型的叶绿体转运肽序列,在催化结构域含有4个高度保守的组氨酸残基。AtNCED蛋白与芭蕉科马来西亚蕉同源性较高,与其他单子叶植物处在同一进化分支。实时荧光定量PCR分析结果表明,AtNCED基因表达量随着层积时间的增加逐渐下降,该基因可能正向调控种子休眠,在草果种子休眠诱导与维持中发挥重要作用。进一步地,利用同源重组方法,成功构建了pBI121-AtNCED过表达载体,并转化至农杆菌E... 

【文章来源】：分子植物育种. 2020,18(05)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

草果种胚总RNA凝胶电泳

草果AtNCED基因的PCR扩增电泳

利用NCBI的CCD(Conserved domain database)软件分析，结果表明AtNCED蛋白属于RPE65超级家族成员(图4)。在NCBI上进行Blastp分析，下载氨基酸序列并利用DNAMAN进行多序列比对，结果表明AtNCED氨基酸序列和其他植物NCED氨基酸序列在N端同源性较低(图5)。AtNCED氨基酸序列与野生型马来西亚蕉MaNCED氨基酸序列(XP＿009399013.1)同源性为81%，与海枣PdNCED氨基酸序列(XP＿008787808.1)同源性为74%，与棕榈EgNCED氨基酸序列(XP＿010923828.1)同源性为73%，与水仙NtNCED氨基酸序列(AGT28471.1)同源性为72%，与凤梨AcNCED1氨基酸序列(OAY73265.1)同源性为76%。说明AtNCED与其他物种的NCED序列有较高的相似性，进一步证实所克隆基因为草果AtNCED基因。图4 草果NCED蛋白结构域分析

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3453412