过表达二穗短柄草BdDREB1-like基因提高烟草的抗氧化能力

发布时间：2021-11-07 16:52

　　为了研究二穗短柄草BdDREB1-like基因在转基因烟草中的功能,克隆了该基因,并进行了生物信息学分析。该基因开放阅读框684 bp,编码228个氨基酸,编码蛋白的分子量为24.178 ku,只含有一个典型的AP2结构域,属于AP2/EREBP（APETALA2/ethylene-responsive element binding protein）超家族的DREB家族。多序列比对与进化分析显示它与黑麦ScCBFI的亲缘关系较近。亚细胞定位分析表明,BdDREB1-like基因定位于细胞核。将其构建到植物表达载体上,并通过农杆菌介导法转入烟草中。PCR和RT-PCR筛选鉴定显示BdDREB1-like基因不仅整合到烟草基因组中而且还能稳定表达。过氧化氢胁迫条件下,转BdDREB1-like基因烟草幼苗具有较高的发芽率。为了进一步确定BdDREB1-like基因与氧化胁迫的关系,又对一个月大的转基因烟草进行氧化胁迫（MV,甲基紫精）处理。结果表明,在正常生长条件下,T3转基因株系除了SOD含量外,测定的其他各种生理指标均与野生型无显著差异,T1转基因株系中只有POD和叶绿素含量与野生型... 

【文章来源】：华北农学报. 2020,35(02)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

DREB1-like基因的PCR扩增(A)、结构(B)与重组载体(C)

用Xba Ⅰ和BamH Ⅰ酶分别双酶切重组质粒pBdDREB1-T改造的植物表达载体pBI121-GFP,回收目的片段,经菌落PCR和测序正确后,获得植物表达载体pBI121-BdDREB1-GFP(图1-C),然后将该重组质粒转入农杆菌EHA105中,经菌落PCR检测正确的再通过叶圆盘法转化烟草。转BdDREB1-like基因的烟草经卡那霉素筛选后共得抗性苗17株,移栽后剩余12株成活;随机挑选7株提取其和野生型烟草基因组的DNA,其中以野生型烟草作为阴性对照进行PCR鉴定。BdDREB1-like基因的烟草中有5株扩增出预期大小一致的目的条带(137 bp),表明BdDREB1-like基因已整合到烟草基因组中(图4-A)。从初步筛选得到的阳性植株中随机选出3株提取RNA,以反转录获得cDNA为模板,利用RT-PCR进一步检测,结果显示转基因的烟草有2个株系能扩增出预期大小目的条带(图4-B),说明BdDREB1-like基因不仅整合到烟草基因组中而且还能稳定表达。图3 多个物种DREB/CBF蛋白的系统进化分析

多个物种DREB/CBF蛋白的系统进化分析

【参考文献】：
期刊论文
[1]苹果赤霉素氧化酶基因MdGA2ox8的克隆及功能分析[J]. 李飞鸿,侯应军,李雪涵,余心怡,渠慎春.  中国农业科学. 2018(22)
[2]新的禾本科模式植物——二穗短柄草[J]. 李平,朱伟然,严学兵,王成章,何云,雒爱玲,徐兵,杨玲玲.  草原与草坪. 2008(06)



本文编号：3482211