包含ARS/CEN元件的游离质粒在巴斯德毕赤酵母中的稳定性研究

发布时间：2021-11-08 03:45

　　巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)是应用最为广泛的外源蛋白表达系统之一。目前使用最多的外源蛋白表达策略是使用整合型质粒;游离型质粒由于其高不稳定性,在毕赤酵母中的应用受到极大的限制。将ARS/CEN等元件连接到pPIC9K载体上,构建能够自主复制的游离型质粒pPIC9K-ARS/CEN,通过传代培养检测质粒丢失的方法探究毕赤酵母在细胞传代培养过程中游离质粒的稳定性。无选择压力情况下,包含ARS/CEN元件的游离质粒在细胞培养10代之前具有极高的稳定性,随后游离质粒开始丢失,到第20代质粒丢失率高达92.94%。该研究结果为构建稳定的游离质粒毕赤酵母表达系统提供了良好的支撑,并提供了切实可行的质粒消除方法,为毕赤酵母运用CRISPR/Cas9系统进行多基因编辑提供了良好的研究基础。

【文章来源】： 生物学杂志. 2020,37(02)北大核心CSCD

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株与质粒
        1.1.2 主要试剂与仪器
        1.1.3 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 基因合成
        1.2.2 游离型质粒pPIC9K-ARS/CEN的构建
        1.2.3 毕赤酵母GS115感受态的制备
        1.2.4 毕赤酵母GS115阳性菌株的筛选与鉴定
        1.2.5 毕赤酵母基因组的提取
        1.2.6 毕赤酵母GS115不同代数生长曲线的测定
        1.2.7 毕赤酵母GS115质粒丢失率的测定
2 结果
    2.1 pPIC9K-ARS/CEN的构建
    2.2 毕赤酵母GS115阳性转化子的挑选与验证
    2.3 游离质粒pPIC9K-ARS/CEN的传代生长情况
    2.4 游离质粒pPIC9K-ARS/CEN传代丢失率及验证
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]利用游离型表达质粒强化毕赤酵母表达木聚糖酶 [J]. 潘阳,吴丹,吴敬.  生物工程学报. 2018(05)

硕士论文
[1]甘油转运体1缺失型毕赤酵母摇瓶发酵优化及甘油转运体2的鉴定[D]. 张震阳.江南大学 2017



本文编号：3482939