aMPV、IBV、NDV三重RT-PCR以及aMPV N蛋白的表达和间接ELISA方法的建立与应用
发布时间：2021-11-08 10:14
禽偏肺病毒（Avian metapneumovirus,a MPV）主要引起鸡和火鸡的上呼吸道感染,造成蛋鸡产蛋率和蛋品质下降。近年发现a MPV对番鸭等其它禽类也存在致病性。a MPV单一感染致死率不高,但会导致免疫力下降,继发其它疾病,增加死亡率。目前除大洋洲外均出现a MPV感染的报道,该病严重威胁了世界范围内的养禽业。血清学调查表明目前包括广西在内的多个地区养鸡场的鸡群普遍存在a MPV感染,且不同品种、性别和用途的鸡群均感染严重,部分种鸡群阳性感染率甚至达到100%。a MPV分离较为困难,其感染鸡的临床症状、解剖病变又与传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）和新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）相似,传统的病理解剖观察很难区分。此外,近年来a MPV、IBV和NDV混合感染呈多发态势。因此,建立同时检测a MPV、IBV和NDV的诊断方法和了解该病在鸡群的流行情况非常重要。本课题组前期已建立了a MPV的RT-PCR检测方法,因此,本研究在此基础上建立a MPV、IBV及NDV三重RT-PCR检测...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
aMPV多形性病毒粒子电镜图
广西大学硕士学位论文aMPV、IBV、NDV三重RT-PCR以及aMPVN蛋白的表达和间接ELISA方法的建立与应用3的8个编码蛋白中是较为保守的。图1-2偏肺病毒属病毒粒子和基因组结构图Fig.1-2Schematicofmetapneumovirusvirionandgenome1.1.4禽偏肺病毒的复制与侵染机制病毒的复制和转录从3′端先导区开始，基因的转录和表达水平逐渐下降[13]。感染宿主细胞时，aMPV首先通过G蛋白和SH蛋白的介导作用吸附到细胞的表面，然后F蛋白介导其病毒囊膜与细胞表面受体结合，并将核衣壳释放到细胞质中。随后，侵染的核衣壳与蛋白N、P和L脱离，作为模板开始转录和复制。首先负链RNA基因组在RNA聚合酶的作用下转录为mRNA进一步翻译为病毒蛋白和合成子代负链RNA[14]。病毒复制完成后，新复制的基因组RNA与新合成的蛋白N、P、L和M2等会形成核衣壳，由M蛋白介导其转运到细胞膜，而新的合成的F、G和SH蛋白会通过高尔基体的加工变为成熟蛋白，然后经过F蛋白的介导以出芽的形式转运出细胞膜。进而使感染的细胞与邻近的细胞发生融合，使病毒核酸扩散，完成病毒的增殖。
广西大学硕士学位论文aMPV、IBV、NDV三重RT-PCR以及aMPVN蛋白的表达和间接ELISA方法的建立与应用41.2禽偏肺病毒的流行病学1.2.1禽偏肺病毒的宿主与易感动物aMPV的天然宿主是火鸡和鸡，不同日龄都可以感染。雉鸡、鸽子、鹅、鸭子、麻雀、燕子和海鸥等虽然对病毒不易感，没有明显临床症状，但通过多种实验室检测方法发现均有带毒的现象[15-19]。另外，实验室用美国明尼苏达州火鸡C亚型aMPV分离株进行aMPV传播研究，小鼠在感染14d后仍能检测到病毒核酸。C亚型aMPV是潜在的人畜共患病原。1.2.2禽偏肺病毒的传播与分布aMPV主要通过与患病鸡群直接接触或者空气、鸟类迁徙、饲养器材、工作人员、转群等各种间接接触的水平方式传播。虽然在产蛋鸡的生殖道中检测出病毒，但还没有确足的证据支持aMPV可以通过垂直传播[20,21]。养殖场aMPV的爆发通常与家禽的饲养密度和生物安全等息息相关。而从最开始aMPV报道的南非到欧洲，病毒最初的传染源极有可能是迁徙的候鸟。除大洋洲以外的其他国家和地区的所有饲养家禽的区域都曾报道过aMPV的存在或感染。具体分布情况详见图1-3。图1-3aMPV世界分布图Fig.1-3WorlddistributionofaMPV1999年，沈瑞忠团队从黑龙江某肉鸡场患肿头综合症的鸡中分离到一株
【参考文献】：
期刊论文
[1]禽偏肺病毒研究进展[J]. 姜楠,姜利建,孙福亮,王楷宬,王素春. 中国动物检疫. 2020(03)
[2]非洲猪瘟病毒DP96R蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 王西西,吴映彤,吴竞,陈鸿军,郭晓宇,朱鸿飞. 中国动物传染病学报. 2020(01)
[3]规模化肉鸡场鼻气管鸟杆菌、禽呼肠孤病毒和禽偏肺病毒感染状况的血清学调查[J]. 付岳林,崔明仙,白晓,李连敏,吕建国,张诚,陈立功,郝丹,王学静,刘聚祥. 今日畜牧兽医. 2019(02)
[4]禽偏肺病毒Taqman荧光定量PCR方法的建立及应用[J]. 刘佳佳,陈峰,覃健萍,周庆丰,鲁俊鹏,操胜,王占新,田野. 中国兽医杂志. 2017(06)
[5]广西地区规模化鸡场禽偏肺病毒感染情况的血清学调查[J]. 张丽华,李和鸣,袁园,董志华,王海勇,唐宁,韦平,韦天超,黄腾,磨美兰. 中国预防兽医学报. 2017(06)
[6]安徽省部分地区鸡群禽偏肺病毒感染的血清学调查[J]. 张丹俊,戴银,赵瑞宏,胡晓苗,沈学怀,侯宏艳,潘孝成,周学利,朱传民. 动物医学进展. 2017(02)
[7]2012年—2015年我国部分地区禽偏肺病毒的分子流行病学分析[J]. 朱艳梅,宫晓,郭伟伟,徐保娟,李陆梅,郎枫,刘红祥,刘东,范根成. 动物医学进展. 2016(10)
[8]禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白的哺乳动物细胞表达系统表达及鉴定[J]. 李子璇,韦莉,王菁,朱姗姗,张春燕,柳舒航,全荣,阎旭,陈武,刘爵. 北京农学院学报. 2014(04)
[9]A型禽偏肺病毒F蛋白的原核表达与抗原性分析[J]. 阎旭,韦莉,王菁,朱姗姗,张春燕,柳舒航,全荣,李子璇,刘浩,刘爵. 中国兽医杂志. 2014(03)
[10]1株B亚型禽偏肺病毒的分离与鉴定[J]. 薛聪,唐熠,陈琳,崔京腾,欧全宾,孙晓艳,裴苹苹,刁有祥. 中国兽医学报. 2014(01)
博士论文
[1]禽偏肺病毒F蛋白介导膜融合及抑制β-干扰素机制研究[D]. 贠炳岭.中国农业科学院 2016
[2]禽偏肺病毒mRNA甲基转移酶缺陷弱毒疫苗株的研究[D]. 孙静.浙江大学 2014
[3]IBV，NDV，AIV H9感染鸡气管比较蛋白质组分析及鸡galectin CG-1B在NDV感染中作用机制的研究[D]. 孙军峰.中国农业科学院 2014
[4]表达C亚型禽偏肺病毒糖蛋白和融合蛋白的重组新城疫病毒二价苗的构建及免疫效力评价[D]. 胡海霞.吉林大学 2011
硕士论文
[1]禽偏肺病毒通用型抗原和抗体检测方法的建立[D]. 王贝贝.河南农业大学 2018
[2]禽偏肺病毒的分离鉴定及Nested RT-PCR检测方法的建立与应用[D]. 薛聪.山东农业大学 2013
[3]三重PCR检测鸡肉中常见病原菌的研究[D]. 潘彤媛.河北农业大学 2013
[4]禽偏肺病毒检测方法的建立及流行病学调查[D]. 贠炳岭.中国农业科学院 2013
[5]禽肺病毒F蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立[D]. 阎旭.天津科技大学 2013
[6]鸡病毒性呼吸道病原多重RT-PCR检测方法的建立[D]. 姚蓉.华中农业大学 2012
[7]禽偏肺病毒检测方法的建立及应用[D]. 陈琳.山东农业大学 2011
本文编号：3483531
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
aMPV多形性病毒粒子电镜图
广西大学硕士学位论文aMPV、IBV、NDV三重RT-PCR以及aMPVN蛋白的表达和间接ELISA方法的建立与应用3的8个编码蛋白中是较为保守的。图1-2偏肺病毒属病毒粒子和基因组结构图Fig.1-2Schematicofmetapneumovirusvirionandgenome1.1.4禽偏肺病毒的复制与侵染机制病毒的复制和转录从3′端先导区开始，基因的转录和表达水平逐渐下降[13]。感染宿主细胞时，aMPV首先通过G蛋白和SH蛋白的介导作用吸附到细胞的表面，然后F蛋白介导其病毒囊膜与细胞表面受体结合，并将核衣壳释放到细胞质中。随后，侵染的核衣壳与蛋白N、P和L脱离，作为模板开始转录和复制。首先负链RNA基因组在RNA聚合酶的作用下转录为mRNA进一步翻译为病毒蛋白和合成子代负链RNA[14]。病毒复制完成后，新复制的基因组RNA与新合成的蛋白N、P、L和M2等会形成核衣壳，由M蛋白介导其转运到细胞膜，而新的合成的F、G和SH蛋白会通过高尔基体的加工变为成熟蛋白，然后经过F蛋白的介导以出芽的形式转运出细胞膜。进而使感染的细胞与邻近的细胞发生融合，使病毒核酸扩散，完成病毒的增殖。
广西大学硕士学位论文aMPV、IBV、NDV三重RT-PCR以及aMPVN蛋白的表达和间接ELISA方法的建立与应用41.2禽偏肺病毒的流行病学1.2.1禽偏肺病毒的宿主与易感动物aMPV的天然宿主是火鸡和鸡，不同日龄都可以感染。雉鸡、鸽子、鹅、鸭子、麻雀、燕子和海鸥等虽然对病毒不易感，没有明显临床症状，但通过多种实验室检测方法发现均有带毒的现象[15-19]。另外，实验室用美国明尼苏达州火鸡C亚型aMPV分离株进行aMPV传播研究，小鼠在感染14d后仍能检测到病毒核酸。C亚型aMPV是潜在的人畜共患病原。1.2.2禽偏肺病毒的传播与分布aMPV主要通过与患病鸡群直接接触或者空气、鸟类迁徙、饲养器材、工作人员、转群等各种间接接触的水平方式传播。虽然在产蛋鸡的生殖道中检测出病毒，但还没有确足的证据支持aMPV可以通过垂直传播[20,21]。养殖场aMPV的爆发通常与家禽的饲养密度和生物安全等息息相关。而从最开始aMPV报道的南非到欧洲，病毒最初的传染源极有可能是迁徙的候鸟。除大洋洲以外的其他国家和地区的所有饲养家禽的区域都曾报道过aMPV的存在或感染。具体分布情况详见图1-3。图1-3aMPV世界分布图Fig.1-3WorlddistributionofaMPV1999年，沈瑞忠团队从黑龙江某肉鸡场患肿头综合症的鸡中分离到一株
【参考文献】：
期刊论文
[1]禽偏肺病毒研究进展[J]. 姜楠,姜利建,孙福亮,王楷宬,王素春. 中国动物检疫. 2020(03)
[2]非洲猪瘟病毒DP96R蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 王西西,吴映彤,吴竞,陈鸿军,郭晓宇,朱鸿飞. 中国动物传染病学报. 2020(01)
[3]规模化肉鸡场鼻气管鸟杆菌、禽呼肠孤病毒和禽偏肺病毒感染状况的血清学调查[J]. 付岳林,崔明仙,白晓,李连敏,吕建国,张诚,陈立功,郝丹,王学静,刘聚祥. 今日畜牧兽医. 2019(02)
[4]禽偏肺病毒Taqman荧光定量PCR方法的建立及应用[J]. 刘佳佳,陈峰,覃健萍,周庆丰,鲁俊鹏,操胜,王占新,田野. 中国兽医杂志. 2017(06)
[5]广西地区规模化鸡场禽偏肺病毒感染情况的血清学调查[J]. 张丽华,李和鸣,袁园,董志华,王海勇,唐宁,韦平,韦天超,黄腾,磨美兰. 中国预防兽医学报. 2017(06)
[6]安徽省部分地区鸡群禽偏肺病毒感染的血清学调查[J]. 张丹俊,戴银,赵瑞宏,胡晓苗,沈学怀,侯宏艳,潘孝成,周学利,朱传民. 动物医学进展. 2017(02)
[7]2012年—2015年我国部分地区禽偏肺病毒的分子流行病学分析[J]. 朱艳梅,宫晓,郭伟伟,徐保娟,李陆梅,郎枫,刘红祥,刘东,范根成. 动物医学进展. 2016(10)
[8]禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白的哺乳动物细胞表达系统表达及鉴定[J]. 李子璇,韦莉,王菁,朱姗姗,张春燕,柳舒航,全荣,阎旭,陈武,刘爵. 北京农学院学报. 2014(04)
[9]A型禽偏肺病毒F蛋白的原核表达与抗原性分析[J]. 阎旭,韦莉,王菁,朱姗姗,张春燕,柳舒航,全荣,李子璇,刘浩,刘爵. 中国兽医杂志. 2014(03)
[10]1株B亚型禽偏肺病毒的分离与鉴定[J]. 薛聪,唐熠,陈琳,崔京腾,欧全宾,孙晓艳,裴苹苹,刁有祥. 中国兽医学报. 2014(01)
博士论文
[1]禽偏肺病毒F蛋白介导膜融合及抑制β-干扰素机制研究[D]. 贠炳岭.中国农业科学院 2016
[2]禽偏肺病毒mRNA甲基转移酶缺陷弱毒疫苗株的研究[D]. 孙静.浙江大学 2014
[3]IBV，NDV，AIV H9感染鸡气管比较蛋白质组分析及鸡galectin CG-1B在NDV感染中作用机制的研究[D]. 孙军峰.中国农业科学院 2014
[4]表达C亚型禽偏肺病毒糖蛋白和融合蛋白的重组新城疫病毒二价苗的构建及免疫效力评价[D]. 胡海霞.吉林大学 2011
硕士论文
[1]禽偏肺病毒通用型抗原和抗体检测方法的建立[D]. 王贝贝.河南农业大学 2018
[2]禽偏肺病毒的分离鉴定及Nested RT-PCR检测方法的建立与应用[D]. 薛聪.山东农业大学 2013
[3]三重PCR检测鸡肉中常见病原菌的研究[D]. 潘彤媛.河北农业大学 2013
[4]禽偏肺病毒检测方法的建立及流行病学调查[D]. 贠炳岭.中国农业科学院 2013
[5]禽肺病毒F蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立[D]. 阎旭.天津科技大学 2013
[6]鸡病毒性呼吸道病原多重RT-PCR检测方法的建立[D]. 姚蓉.华中农业大学 2012
[7]禽偏肺病毒检测方法的建立及应用[D]. 陈琳.山东农业大学 2011
本文编号：3483531
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3483531.html
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