一个MYB转录因子在棉花（Gossypium hirsutum）纤维细胞次生壁发育中的功能研究
发布时间：2021-11-17 19:55
棉花是世界上一种重要的经济作物,棉纤维不仅可以作为纺织工业的纺织原料,而且在农业和食品等产业中也发挥重要作用。棉纤维品质对于纺织工业及其相关产业极为重要。以往的研究表明,棉纤维细胞次生壁发育主要决定着棉纤维强度。棉纤维细胞次生壁主要由纤维素构成,主要受到NAC和MYB转录因子及其下游转录因子所构成的网络调控。本实验室在之前的研究中,分离鉴定了一个R2R3-MYB转录因子GhMYBL1。在拟南芥中过表达GhMYBL1,发现转基因植株的细胞次生壁组分出现了异位沉积,并且CesA4/7/8等细胞次生壁相关基因的表达被激活。本文主要研究GhMYBL1在棉花中的功能,在获得GhMYBL1转基因棉花材料之后,对转基因棉花表型进行了分析,并对GhMYBL1调控纤维细胞次生壁发育的分子机制进行了探讨。本文获得的研究结果如下:1、GhMYBL1基因参与调节棉纤维细胞次生壁发育为了研究GhMYBL1基因在棉纤维发育中的功能,我们对T1代GhMYBL1RNAi转基因棉花材料进行了表型分析。RT-PCR分析表明,转基因棉花纤维中GhMYBL1表达显著下降。对不同RNAi转基因棉花株系材料的成熟纤维进行了测量,...
【文章来源】：华中师范大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．３植物体内ＩＡＡ合成路线图（Ｚｈａｏ，?２０１０）??ＩＡＡ在合成之后，以游离态和轭合态两种状态存在，其中轭合态的ＩＡＡ是没柯??活性的
?ｒｅｐｒｅｓｓｅｄ??Ｃｕｌｌ?Ａｕｘｉｎ??—??ＡＲＥｓ??Ａｕｘｍ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ?ｇｅｎｅ??八，??Ｕｂ??脒?Ｕｂｚ??Ｉ?Ｉ?Ｘ??Ｅ１?＾?Ｅ２??Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ?Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ?＼３??ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ?Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇ?＾?＼?．??ｅｎｚｙｍｅ?ｅｎｚｙｍｅ?Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ??＼??Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ??ＡＲＦ?ＡＲＦ?ａｃｔｉｖｅ??ＡＲＥｓ??Ａｕｘｉｎ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ?ｇｅｎｅ??图１．４生长素信号通路图（Ｍｉｒｏｎｏｖａ?ｅｔ?ａｌ．，２０１４）??１．４．４生长素对棉花纤维发育的影响??研究表明，生长素在棉纤维细胞发育中起着重要的调控作用。例如，外源施加??ＩＡＡ?显著增加了总纤维的体积（Ｂｅａｓｌｅｙ，?１９７３；?Ｃｈｅｎ?ｅｔａｌ．，?２０１１；?Ｇｕｉｎｎ?ｅｔａｌ．，１９８８）９??１０??
系的??ＲＮＡｉ?ＴＯ代材料。将其种植后收到Ｔ１代棉花材料的种子，发苗种在田里。经过精??心照顾，待其长出幼嫩的真叶。采取少ＳＫ叶，通过植物基因组ＤＮＡ提取试剂盒??进行棉花ｇＤＮＡ提取，具体实验操作步骤详见说明书。以提取的棉花ｇＤＮＡ为模板，??以Ｇ／７Ｍ７５Ｚ７?Ｒｌ＋Ｇ；？ｎ＾９Ｉｎｔｒｏｎ?Ｐ１为特异性引物进行ＰＣＲ。将ＰＣＲ产物进行ＤＮＡ??琼脂糖凝胶电泳检测。结果显示，ＧＭ／ｒａ／Ｊ?ＲＮＡｉ的Ｔ１代材料阳性率为１００％。??Ｍｌ?２３４５６７８９?１０?１１?１２??图３．?１?ＲＮＡｉ转基因棉花Ｔ１代阳性苗检测??Ｍ：ＭａｒｋｅｒＤＬ２０００，ｌ：阴性对照，２：阳性对照，３－１２：转基因棉花植株。??３丄２?ＲＮＡｉ转基因棉花基因表达分析??为了观察Ｇ／７Ａ／７５Ｚ／在转基因材料中的表达量，我们收取了?１８ＤＰＡ的棉花纤维??材料。通过植物ＲＮＡ提取试剂盒提取１８ＤＰＡ棉花纤维细胞总ＲＮＡ，具体实验步骤??详见说明书。取少量ＲＮＡ进行ＲＮＡ琼脂糖凝胶电泳检测，观察提取ＲＮＡ的完整??性。结果显示ＲＮＡ没有发生降解。??Ｍ?１?２?３??图３．?２?ＲＮＡ琼脂糖凝胶电泳检测??Ｍ：ＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；?１：野生型棉花?１８ＤＰＡ?棉纤维?ＲＮＡ；?２－３：?Ｇ／ｉＭｒＳＺＪ?ＲＮＡｉ?转基因棉花??Ｌ１２３株系和Ｌ４株系１８ＤＰＡ棉纤维ＲＮＡ，??将检测合格的ＲＮＡ进行逆转录，逆转录实验操作步骤详见方法２．２．３。以逆转??２１??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Developmental and hormonal regulation of fiber quality in two natural-colored cotton cultivars[J]. ZHANG Xiang,HU Da-peng,LI Yuan,CHEN Yuan,Eltayib H.M.A.Abidallha,DONG Zhao-di,CHEN De-hua,ZHANG Lei. Journal of Integrative Agriculture. 2017(08)
[2]Cotton GhMYB7 is predominantly expressed in developing fibers and regulates secondary cell wall biosynthesis in transgenic Arabidopsis[J]. Junfeng Huang,Feng Chen,Siyu Wu,Juan Li,Wenliang Xu. Science China（Life Sciences）. 2016(02)
本文编号：3501558
【文章来源】：华中师范大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．３植物体内ＩＡＡ合成路线图（Ｚｈａｏ，?２０１０）??ＩＡＡ在合成之后，以游离态和轭合态两种状态存在，其中轭合态的ＩＡＡ是没柯??活性的
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系的??ＲＮＡｉ?ＴＯ代材料。将其种植后收到Ｔ１代棉花材料的种子，发苗种在田里。经过精??心照顾，待其长出幼嫩的真叶。采取少ＳＫ叶，通过植物基因组ＤＮＡ提取试剂盒??进行棉花ｇＤＮＡ提取，具体实验操作步骤详见说明书。以提取的棉花ｇＤＮＡ为模板，??以Ｇ／７Ｍ７５Ｚ７?Ｒｌ＋Ｇ；？ｎ＾９Ｉｎｔｒｏｎ?Ｐ１为特异性引物进行ＰＣＲ。将ＰＣＲ产物进行ＤＮＡ??琼脂糖凝胶电泳检测。结果显示，ＧＭ／ｒａ／Ｊ?ＲＮＡｉ的Ｔ１代材料阳性率为１００％。??Ｍｌ?２３４５６７８９?１０?１１?１２??图３．?１?ＲＮＡｉ转基因棉花Ｔ１代阳性苗检测??Ｍ：ＭａｒｋｅｒＤＬ２０００，ｌ：阴性对照，２：阳性对照，３－１２：转基因棉花植株。??３丄２?ＲＮＡｉ转基因棉花基因表达分析??为了观察Ｇ／７Ａ／７５Ｚ／在转基因材料中的表达量，我们收取了?１８ＤＰＡ的棉花纤维??材料。通过植物ＲＮＡ提取试剂盒提取１８ＤＰＡ棉花纤维细胞总ＲＮＡ，具体实验步骤??详见说明书。取少量ＲＮＡ进行ＲＮＡ琼脂糖凝胶电泳检测，观察提取ＲＮＡ的完整??性。结果显示ＲＮＡ没有发生降解。??Ｍ?１?２?３??图３．?２?ＲＮＡ琼脂糖凝胶电泳检测??Ｍ：ＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；?１：野生型棉花?１８ＤＰＡ?棉纤维?ＲＮＡ；?２－３：?Ｇ／ｉＭｒＳＺＪ?ＲＮＡｉ?转基因棉花??Ｌ１２３株系和Ｌ４株系１８ＤＰＡ棉纤维ＲＮＡ，??将检测合格的ＲＮＡ进行逆转录，逆转录实验操作步骤详见方法２．２．３。以逆转??２１??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Developmental and hormonal regulation of fiber quality in two natural-colored cotton cultivars[J]. ZHANG Xiang,HU Da-peng,LI Yuan,CHEN Yuan,Eltayib H.M.A.Abidallha,DONG Zhao-di,CHEN De-hua,ZHANG Lei. Journal of Integrative Agriculture. 2017(08)
[2]Cotton GhMYB7 is predominantly expressed in developing fibers and regulates secondary cell wall biosynthesis in transgenic Arabidopsis[J]. Junfeng Huang,Feng Chen,Siyu Wu,Juan Li,Wenliang Xu. Science China（Life Sciences）. 2016(02)
本文编号：3501558
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