长链非编码RNA DANCR通过miR-1275/MMP-13诱导滑膜间充质干细胞增殖和向软骨分化的机制研究

发布时间：2021-11-20 16:50

　　目的:本研究旨在探讨lncRNA DANCR促进滑膜间充质干细胞增殖和诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的机制,以期为滑膜间充质干细胞向软骨组织分化和增殖提供理论基础。方法:（1）术中收集患者的关节液标本,提取患者关节液中的SMSCs,在体外培养扩增、纯化、诱导并对其进行鉴定。（2）敲低和过表达SMSCs中的lncRNA DANCR,同时设立空白对照组,通过CCK-8实验、Sox9、Col II在mRNA和蛋白质水平的表达情况等来检测SMSCs的增殖和软骨细胞分化能力。（3）通过生信预测分析、双荧光素酶报告基因实验、RIP等确定lncRNA DANCR的靶基因是否为miR-1275;过表达lncRNA DANCR的同时敲低miR-1275以及敲低lncRNA DANCR的同时过表达miR-1275以再次佐证。（4）Taget Scan生信预测分析、双荧光素酶报告基因实验确定MMP-13mRNA是否为miR-1275的靶基因;敲低和过表达miR-1275,以再次佐证。（5）敲低和过表达lncRNA DANCR后检测MMP-13在mRNA和蛋白质上水平;过表达lncRNA DANCR的同时... 

【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：41 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

滑膜间充质干细胞(SMSCs)的鉴定

DANCR对SMSCs增殖的影响

南京大学硕士学位论文14促进SMSCs软骨形成。图3DANCR对SMSCs软骨分化的影响。(A,B)Westernblot分析DANCR对Sox9和ColII蛋白表达的影响。(C)通过qRT-PCR分析了DANCR对Sox9和ColIImRNA表达的影响。(D)对照组、敲低组和过表达组中sGAG含量。*p<0.054.DANCR直接与miR-1275相互作用为了探讨miRNAs是否参与了DANCR促进SMSCs增殖和软骨分化，我们使用了miRcode来识别与DANCR相互作用的miRNA。图4A显示，miR-1275在3’-UTR处通过碱基互补配对与DANCR结合。QRT-PCR结果显示，转染sh-DANCR质粒的SMSCs中，miR-1275表达增加，而转染DANCR质粒的SMSCs中，miR-1275表达减少(图4B)。RNA结合蛋白免疫沉淀检测结果显示，与对照组相比，anti-Ago2在很大程度上捕获了DANCR和miR-1275,提示了DANCR和miR-1275的结合(图4C)。双荧光素酶报告基因实验显示，miR-1275模拟物显著降低了DANCR-WT组的荧光素酶活性(图4D)。


本文编号：3507750