非核糖体肽合成酶腺苷化结构域在E.coli中的表达及底物特异性分析

发布时间：2021-12-22 00:18

　　侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)S62-9产生的抗菌肽(Brevibacillin,BBL)是一种非核糖体多肽,由非核糖体肽合成酶催化合成。本研究所用基因是从侧孢短芽孢杆菌(B. laterosporus)S62-9质粒基因组中克隆的一个非核糖体肽合成酶的腺苷化结构域(Nonribosomal peptide synthetase adenylation, NRPS-A)基因,根据此NRPS-A基因构建了pET21b-N1、pET21b-B2、pET22b-N1、pET22b-N3四个重组表达载体。将以上重组表达载体分别转化E. coli BL21、E. coli Rosetta(DE3)和E. coli Origami B(DE3)受体细胞,并用1 mmol/L异丙基β-d-硫代吡喃半乳糖吡喃糖苷(IPTG)在16°C 200 r/min下进行诱导,将诱导产物用SDS-PAGE检测分析。结果显示,4种重组载体在E.coliBL21中均无表达,在E.coliRosetta(DE3)大量表达但均以包涵体形式存在,在E. coli Origami B(...

【文章来源】： 河北农业大学学报. 2020,43(01)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株和质粒载体
    1.2 试剂
    1.3 方法
        1.3.1 质粒的提取
        1.3.2 引物设计
        1.3.3 NRPS-A结构域基因的PCR扩增
        1.3.4 载体构建与序列分析
        1.3.5 NRPS-A结构域基因的表达
        1.3.6 可溶性融合蛋白的纯化
        1.3.7 氨基酸腺苷化活性测定
2 结果与分析
    2.1 NRPS-A结构域基因的克隆
    2.2 氨基酸序列分析
    2.3 目的蛋白的诱导表达
        2.3.1 不同表达受体的诱导表达
        2.3.2 可溶性蛋白的纯化
    2.4 特异性底物检测
3 结论与讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]密码子中的密码:密码子偏好性与基因表达的精细调控 [J]. 任桂萍,董璎莹,党云琨.  中国科学:生命科学. 2019(07)
[2]非核糖体肽合成酶基因腺苷酰化结构域序列克隆及分析 [J]. 薛永常,张成锁,李根.  微生物学杂志. 2019(01)
[3]一种新型抗菌肽基因决定簇的克隆与序列结构特征 [J]. 刘洋,柯晓静,于宏伟,郭润芳.  河北农业大学学报. 2019(01)
[4]非核糖体肽合成酶研究进展 [J]. 韩梦瑶,陈晶晶,乔云明,朱平.  药学学报. 2018(07)
[5]极端嗜热酸性α-淀粉酶PFA在枯草芽孢杆菌中的高效分泌表达 [J]. 袁林,曾静,郭建军,郭浩,杨罡,陈俊.  食品科学. 2018(18)
[6]密码子优化提高多粘类芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶异源表达量 [J]. 陈荫楠,刘震,石贤爱,王祖鑫.  中国生物化学与分子生物学报. 2017(04)
[7]含抗菌肽基因的天然质粒在枯草杆菌中的表达 [J]. 张楠,刘洋,于宏伟,柯晓静,郭润芳,贾英民.  食品科学. 2017(08)
[8]侧孢短芽孢杆菌S62-9抗菌肽基因的初步定位 [J]. 张楠,刘洋,柯晓静,于宏伟,郭润芳,贾英民.  河北农业大学学报. 2016(05)
[9]海洋放线菌代谢产物、非核糖体多肽、腺苷化结构域研究进展 [J]. 陆胜利,祁超.  华中师范大学学报(自然科学版). 2015(01)
[10]海洋稀有放线菌Salinispora arenicola CNP193基因组新颖PKS和NRPS基因簇的发掘 [J]. 房耀维,刘姝,王淑军,吕明生,焦豫良,陈国强,潘建梅,牛军.  海洋科学. 2014(12)

博士论文
[1]枯草杆菌fmb60的NRPS和Ⅰ型PKS基因簇代谢产物发掘及其生物活性研究[D]. 杨杰.南京农业大学. 2017

硕士论文
[1]NRPS-A在侧孢短芽孢杆菌S62-9抗菌肽生物合成中的功能分析[D]. 刘洋.河北农业大学. 2018
[2]二硫键氧化还原酶DsbA/DsbC协助瑞替普酶包涵体体外复性研究[D]. 王俊雄.浙江大学. 2015



本文编号：3545431