D6-Cre、Emx1-Cre、hGFAP-Cre三种大脑皮层发育相关工具鼠表达特征的比较研究

发布时间：2021-12-24 04:12

　　大脑皮层内部区域组织高度专业化,是哺乳动物中枢神经系统的重要组成部分。大脑皮层的生成过程具有时序性和时空特异性。大脑皮层中各层神经元可以投射到不同的区域,发挥不同的功能,以维持神经系统正常的功能。如果产生的神经元类型及其分布发生异常,则会导致众多临床上的疾病,如自闭症,精神分裂症,癫痫等。所以研究大脑皮层发育过程中神经元精确有序的生成和定位具有重要意义。在实验室前期工作中,通过原位杂交技术发现D6-Cre和hGFAP-Cre介导的Dicer条件性敲除小鼠端脑中均出现了由Dicer敲除导致的microRNA缺失,但是不同Cre介导的条件性敲除小鼠也出现了不同的表型。为了探索其表型差异的原因,我们进行了在研究大脑皮层方面应用较多的三种Cre工具鼠D6-Cre、Emx1-Cre、hGFAP-Cre表达特征的比较。在本研究中发现,Emx1-Cre、D6-Cre、hGFAP-Cre工具鼠Cre重组酶在大脑皮层中的起始表达时间分别为胚胎期第9.5天（即E9.5）、E10.5以后（约为E11）和E12.5。随着发育的进行,D6-Cre重组酶的表达始终局限于端脑,而Emx1-Cre和hGFAP-Cre... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Cre工具鼠Cre重组酶检测原理

鼠Ｘ－ｇａｌ染色结果；Ｄ和Ｅ为Ｅ１３．５胚胎脑组织Ｘ－ｇａｌ染色结果。??接下来，取Ｄ６－Ｃｒｅ工具鼠与ＲＯＳＡ２６－Ｒ小鼠交配后产生的Ｅ９．５到Ｅ１２．５胚胎，??进行Ｘ－ｇａｌ染色。如图２所示，可以观察到：Ｅ１０．５天时，并没有检测到Ｘ－ｇａｌ着色，??即Ｄ６－Ｃｒｅ的起始表达时间不是Ｅ１０．５；而在Ｅ１１．５天时，可以检测到蓝色产物的出??现，即在Ｅ１１．５时，该工具鼠有Ｄ６－Ｃｒｅ重组酶的表达。这说明Ｄ６－Ｃｒｅ重组酶的表??达在Ｅ１０．５至丨ＪＥ１１．５之间，与文献报道并不一致，比文献中报道时间稍晚。在Ｅ１２．５??时，从胚胎外部进行观察，Ｘ－ｇａｌ着色区域仍然局限于局大脑皮层；但与Ｅ１１．５胚胎??相比，其着色范围有所扩大。这就是说，Ｅ１２．５时Ｄ６－Ｃｒｅ重组酶的表达范围有所扩??大，但仍局限于大脑皮层，且在胚胎端脑外其它部位没有表达。??２８??

２．?Ｄ６－Ｃｒｅ工具鼠Ｃｒｅ重组酶表达存在个体差异??在用Ｘ－ｇａｌ染色方法对Ｄ６－Ｃｒｅ工具鼠表达的Ｃｒｅ重组酶进行检测时，观察到??Ｄ６－Ｃｒｅ的表达存在个体差异性。如图３所示，从Ｅ１１．５同窝８只Ｄ６－Ｃｒｅ／ｌａｃＺ小鼠??胚胎的Ｘ－ｇａｌ染色结果中，可以看出Ｘ－ｇａｌ显色部位虽然均于大脑皮层上，但是其??具体范围和显色程度有很大差异。图２Ａ到２Ｃ中小鼠Ｘ－ｇａｌ显色程度较高，图２Ｄ??到２Ｈ中Ｘ－ｇａｌ显色程度较低，甚至在２Ｈ中Ｘ－ｇａｌ的显色极其微弱。这一结果提示??Ｄ６－Ｃｒｅ的表达范围和表达程度存在个体差异性。??２９??


本文编号：3549797