永生化人肝星状细胞株WM07的建立

发布时间：2021-12-31 10:16

　　目的以慢病毒载体介导猿猴病毒40（simian virus 40,SV40）大肿瘤抗原（large tumor antigen,TAg）转染原代人肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）获得永生化HSC株。方法以含SV40 TAg cDNA序列的SV40tsA58质粒为模板,PCR获取全长SV40 TAg序列,经TOPO克隆进入pENTR^TMTOPO^?载体,PCR鉴定获得pENTR-SV40 TAg Entrez质粒,再经LR重组反应将SV40 TAg cDNA克隆到目标慢病毒载体pLenti4/V5-DEST,PCR鉴定pLenti4/V5-GW/SV40 TAg质粒,进一步用该质粒转染工程细胞293FT进行假病毒包装,用含包装病毒的细胞培养上清液转染原代人HSC,经博来霉素筛选获得稳定表达SV40 TAg的人HSC株（命名为WM07）,并对细胞进行SV40 TAg及α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）表达的检测和鉴定。结果对pENTR-SV40 TAg Entrez质粒及pL... 

【文章来源】：复旦学报(医学版). 2020,47(06)北大核心CSCD

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【部分图文】：

M13正向引物对p ENTR-SV40 TAg Entrez质粒进行PCR测序的结果

图2 M13正向引物对p ENTR-SV40 TAg Entrez质粒进行PCR测序的结果图4 免疫荧光染色永生化HSC株WM07的SV40 TAg表达（×100)

图3 CMV正向引物对p Lenti4/V5-GW/SV40 TAg慢病毒表达质粒进行PCR测序结果图5 免疫荧光染色永生化人HSC株WM07的α-SMA的表达（×20)

【参考文献】：
期刊论文
[1]人肝脏星状细胞的一种改良分离方法[J]. 王满,郭津生,涂传涛,王吉耀,Scott L.Friedman.  复旦学报(医学版). 2008(04)



本文编号：3560080