宿主蛋白SYNCRIP和MCM3在猪细小病毒复制过程中作用及机制研究
发布时间：2021-12-31 10:49
猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）是引起母猪繁殖障碍性疾病重要病原,能够引起初孕母猪流产、产死胎、畸胎和木乃伊胎等,给养猪业造成了巨大的经济损失。PPV基因组主要包括2个开放性阅读框（Open Reading Frame,ORF）ORF1和ORF2,ORF1主要编码非结构蛋白NS1和NS2,它们的功能是参与病毒复制及致细胞病变。NS2具有与NS1相同的N末端,且NS2-m RNA是由NS1-m RNA（pre-m RNA,NS2-m RNA的前体m RNA）经可变剪接之后产生。宿主蛋白Syncrip是核不均一核糖核蛋白（Heterogenous nuclear ribonucleo proteins,hn RNPs）家族成员之一,与宿主细胞m RNA的转录、外显子剪接以及剪接位点的选择等过程相关,此外还参与了某些肝炎病毒的复制。ORF2主要编码结构蛋白VP1和VP2,VP2是PPV最主要的衣壳蛋白,占衣壳成分的80%左右,在病毒感染过程中VP2参与了病毒基因组的入核和成熟病毒粒子的组装。宿主蛋白MCM3是解旋酶MCM家族成员之一,在宿主DNA复制过程中能够使双链...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：161 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
NS蛋白信号肽分析（A）和跨膜区分析（B）
第三章猪细小病毒非结构蛋白NS多克隆抗体制备23图3-2NS的结构生物信息学分析A：蛋白α螺旋结构预测（Chou-Fasman法与Gamier-Robson法）；B：蛋白亲水性预测（Kyte-Doolittle法）；C：蛋白的柔性区域预测（Karplus-Schulz法）；D：蛋白潜在的抗原表位预测（Jameson-wolf法）；E：蛋白可能性预测方法（Emini法）Fig.3-2StructurebioinformaticsanalysisofNSproteinA:α-Helixprediction(Chou-FasmanandGamier-Robsonmodels);B:Hydrophilicityprediction(Kyte-Doolittlemodel);C:Flexibleregionsprediction(Karplus-Schulzmodel);D:Antigenicprediction(Jameson-wolfmodel);E:Surfaceprobabilityprediction(Eminimodel)3.3.2重组质粒pET-32a-NS的构建和鉴定将扩增出的ns基因克隆入原核表达载体pET-32a上构建重组载体，经PCR鉴定扩增出大小约为250bp左右的目的条带，与预期大小相一致（图3-3）。进一步将PCR鉴定阳性菌扩大培养，提取质粒经BamHI和XhoI双酶切鉴定后分别出现了约6000bp和250bp的条带，与预期大小相一致（图3-4），测序鉴定正确。以上结果表明重组质粒pET-32a-NS构建成功。图3-3pET-32a-NS重组质粒的PCR鉴定M：DNA标准DL2000plus，1：阴性对照，2~3：pET-32a-NS的PCR鉴定Fig.3-3PCRidentificationofrecombinantplasmidpET-32a-NSM:DNAMarkerDL2000plus,1:Negativecontrol,2~3:PCRidentificationofpET-32a-NS
第三章猪细小病毒非结构蛋白NS多克隆抗体制备23图3-2NS的结构生物信息学分析A：蛋白α螺旋结构预测（Chou-Fasman法与Gamier-Robson法）；B：蛋白亲水性预测（Kyte-Doolittle法）；C：蛋白的柔性区域预测（Karplus-Schulz法）；D：蛋白潜在的抗原表位预测（Jameson-wolf法）；E：蛋白可能性预测方法（Emini法）Fig.3-2StructurebioinformaticsanalysisofNSproteinA:α-Helixprediction(Chou-FasmanandGamier-Robsonmodels);B:Hydrophilicityprediction(Kyte-Doolittlemodel);C:Flexibleregionsprediction(Karplus-Schulzmodel);D:Antigenicprediction(Jameson-wolfmodel);E:Surfaceprobabilityprediction(Eminimodel)3.3.2重组质粒pET-32a-NS的构建和鉴定将扩增出的ns基因克隆入原核表达载体pET-32a上构建重组载体，经PCR鉴定扩增出大小约为250bp左右的目的条带，与预期大小相一致（图3-3）。进一步将PCR鉴定阳性菌扩大培养，提取质粒经BamHI和XhoI双酶切鉴定后分别出现了约6000bp和250bp的条带，与预期大小相一致（图3-4），测序鉴定正确。以上结果表明重组质粒pET-32a-NS构建成功。图3-3pET-32a-NS重组质粒的PCR鉴定M：DNA标准DL2000plus，1：阴性对照，2~3：pET-32a-NS的PCR鉴定Fig.3-3PCRidentificationofrecombinantplasmidpET-32a-NSM:DNAMarkerDL2000plus,1:Negativecontrol,2~3:PCRidentificationofpET-32a-NS
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国10株猪细小病毒7型全基因组遗传与重组分析[J]. 张志,张丽丽,刘爽,董雅琴,张慧,张峰,崔进,吴发兴,李晓成. 中国兽医学报. 2020(02)
[2]猪Cyclin A和CDK2蛋白对猪细小病毒增殖的调控作用[J]. 唐青海,杨海,彭永刚,杨灿,何丽芳,王芳宇. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2020(08)
[3]鸭寡腺苷酸合成酶样蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 毕可然,李银,韩凯凯,赵冬敏,刘青涛,刘宇卓,黄欣梅,杨婧. 中国农业科学. 2019(23)
[4]大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定[J]. 牛夏忆,李淼,张倩,陈云雨,刘晓平. 中国免疫学杂志. 2019(16)
[5]猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化及鉴定[J]. 王席,李国攀,陈清清,徐保娟,荣俊. 中国畜牧兽医. 2019(06)
[6]MDGPV PT株E-box缺失感染性克隆的构建及生物学特性分析[J]. 王劭,肖世峰,程晓霞,江丹丹,林锋强,朱小丽,陈仕龙,陈少莺. 中国兽医学报. 2019(06)
[7]伪狂犬病病毒UL56蛋白与宿主蛋白Nedd4相互作用的研究[J]. 王书文,吕闯,蔡雪辉. 中国预防兽医学报. 2019(06)
[8]流感病毒NS1蛋白与宿主蛋白DOK6的相互作用研究[J]. 黄山雨,梁立滨,李俊平,王倩,赵青青,周陈陈,赵玉辉,王广文,李奇兵,孔凡迪,李呈军,陈化兰,姜丽. 中国预防兽医学报. 2019(10)
[9]家蚕热休克蛋白HSP60相互作用蛋白筛选与鉴定[J]. 董战旗,蒋亚明,潘敏慧. 中国农业科学. 2019(02)
[10]NDRVσC蛋白互作的宿主因子筛选及生物信息学分析[J]. 肖容,杜夏夏,李传峰,马文戈,米晓云,刘光清,周海龙,陈宗艳. 中国动物传染病学报. 2019(04)
博士论文
[1]猪细小病毒诱导猪黄体细胞凋亡及抑制孕酮产生机制研究[D]. 张樑.西北农林科技大学 2018
[2]人细小病毒B19非结构蛋白对启动子的调控及其出核转运机制研究[D]. 董衍明.华中师范大学 2013
硕士论文
[1]家蚕二分浓核病毒NS1蛋白表达分析及其互作蛋白研究[D]. 刘伟.江苏大学 2017
本文编号：3560124
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：161 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
NS蛋白信号肽分析（A）和跨膜区分析（B）
第三章猪细小病毒非结构蛋白NS多克隆抗体制备23图3-2NS的结构生物信息学分析A：蛋白α螺旋结构预测（Chou-Fasman法与Gamier-Robson法）；B：蛋白亲水性预测（Kyte-Doolittle法）；C：蛋白的柔性区域预测（Karplus-Schulz法）；D：蛋白潜在的抗原表位预测（Jameson-wolf法）；E：蛋白可能性预测方法（Emini法）Fig.3-2StructurebioinformaticsanalysisofNSproteinA:α-Helixprediction(Chou-FasmanandGamier-Robsonmodels);B:Hydrophilicityprediction(Kyte-Doolittlemodel);C:Flexibleregionsprediction(Karplus-Schulzmodel);D:Antigenicprediction(Jameson-wolfmodel);E:Surfaceprobabilityprediction(Eminimodel)3.3.2重组质粒pET-32a-NS的构建和鉴定将扩增出的ns基因克隆入原核表达载体pET-32a上构建重组载体，经PCR鉴定扩增出大小约为250bp左右的目的条带，与预期大小相一致（图3-3）。进一步将PCR鉴定阳性菌扩大培养，提取质粒经BamHI和XhoI双酶切鉴定后分别出现了约6000bp和250bp的条带，与预期大小相一致（图3-4），测序鉴定正确。以上结果表明重组质粒pET-32a-NS构建成功。图3-3pET-32a-NS重组质粒的PCR鉴定M：DNA标准DL2000plus，1：阴性对照，2~3：pET-32a-NS的PCR鉴定Fig.3-3PCRidentificationofrecombinantplasmidpET-32a-NSM:DNAMarkerDL2000plus,1:Negativecontrol,2~3:PCRidentificationofpET-32a-NS
第三章猪细小病毒非结构蛋白NS多克隆抗体制备23图3-2NS的结构生物信息学分析A：蛋白α螺旋结构预测（Chou-Fasman法与Gamier-Robson法）；B：蛋白亲水性预测（Kyte-Doolittle法）；C：蛋白的柔性区域预测（Karplus-Schulz法）；D：蛋白潜在的抗原表位预测（Jameson-wolf法）；E：蛋白可能性预测方法（Emini法）Fig.3-2StructurebioinformaticsanalysisofNSproteinA:α-Helixprediction(Chou-FasmanandGamier-Robsonmodels);B:Hydrophilicityprediction(Kyte-Doolittlemodel);C:Flexibleregionsprediction(Karplus-Schulzmodel);D:Antigenicprediction(Jameson-wolfmodel);E:Surfaceprobabilityprediction(Eminimodel)3.3.2重组质粒pET-32a-NS的构建和鉴定将扩增出的ns基因克隆入原核表达载体pET-32a上构建重组载体，经PCR鉴定扩增出大小约为250bp左右的目的条带，与预期大小相一致（图3-3）。进一步将PCR鉴定阳性菌扩大培养，提取质粒经BamHI和XhoI双酶切鉴定后分别出现了约6000bp和250bp的条带，与预期大小相一致（图3-4），测序鉴定正确。以上结果表明重组质粒pET-32a-NS构建成功。图3-3pET-32a-NS重组质粒的PCR鉴定M：DNA标准DL2000plus，1：阴性对照，2~3：pET-32a-NS的PCR鉴定Fig.3-3PCRidentificationofrecombinantplasmidpET-32a-NSM:DNAMarkerDL2000plus,1:Negativecontrol,2~3:PCRidentificationofpET-32a-NS
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国10株猪细小病毒7型全基因组遗传与重组分析[J]. 张志,张丽丽,刘爽,董雅琴,张慧,张峰,崔进,吴发兴,李晓成. 中国兽医学报. 2020(02)
[2]猪Cyclin A和CDK2蛋白对猪细小病毒增殖的调控作用[J]. 唐青海,杨海,彭永刚,杨灿,何丽芳,王芳宇. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2020(08)
[3]鸭寡腺苷酸合成酶样蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 毕可然,李银,韩凯凯,赵冬敏,刘青涛,刘宇卓,黄欣梅,杨婧. 中国农业科学. 2019(23)
[4]大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定[J]. 牛夏忆,李淼,张倩,陈云雨,刘晓平. 中国免疫学杂志. 2019(16)
[5]猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化及鉴定[J]. 王席,李国攀,陈清清,徐保娟,荣俊. 中国畜牧兽医. 2019(06)
[6]MDGPV PT株E-box缺失感染性克隆的构建及生物学特性分析[J]. 王劭,肖世峰,程晓霞,江丹丹,林锋强,朱小丽,陈仕龙,陈少莺. 中国兽医学报. 2019(06)
[7]伪狂犬病病毒UL56蛋白与宿主蛋白Nedd4相互作用的研究[J]. 王书文,吕闯,蔡雪辉. 中国预防兽医学报. 2019(06)
[8]流感病毒NS1蛋白与宿主蛋白DOK6的相互作用研究[J]. 黄山雨,梁立滨,李俊平,王倩,赵青青,周陈陈,赵玉辉,王广文,李奇兵,孔凡迪,李呈军,陈化兰,姜丽. 中国预防兽医学报. 2019(10)
[9]家蚕热休克蛋白HSP60相互作用蛋白筛选与鉴定[J]. 董战旗,蒋亚明,潘敏慧. 中国农业科学. 2019(02)
[10]NDRVσC蛋白互作的宿主因子筛选及生物信息学分析[J]. 肖容,杜夏夏,李传峰,马文戈,米晓云,刘光清,周海龙,陈宗艳. 中国动物传染病学报. 2019(04)
博士论文
[1]猪细小病毒诱导猪黄体细胞凋亡及抑制孕酮产生机制研究[D]. 张樑.西北农林科技大学 2018
[2]人细小病毒B19非结构蛋白对启动子的调控及其出核转运机制研究[D]. 董衍明.华中师范大学 2013
硕士论文
[1]家蚕二分浓核病毒NS1蛋白表达分析及其互作蛋白研究[D]. 刘伟.江苏大学 2017
本文编号：3560124
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