白桦转录因子BpSPL8遗传转化及功能分析

发布时间：2022-01-02 00:05

　　植物SPL是一类能与SQUAMOSA启动子结合的转录因子,在植物的生长发育中发挥着十分重要的作用。在前期的研究中,我们发掘到一条非miR156靶向的白桦BpSPL8基因,该基因转化拟南芥后能影响转基因植株叶和根的发育。本文将在此基础上进一步研究BpSPL8调控植物发育机理。通过克隆获得了白桦BpSPL8起始密码子上游2028bp的启动子片段;构建了BpSPL8启动子驱动GLU（β-葡萄糖苷酸酶编码基因）的植物表达载体,并采用浸花法将其转化至拟南芥中;继而利用GUS染色分析了BpSPL8启动子的组织表达模式;启动子元件分析显示BpSPL8启动子中含有组织特异表达、光响应、激素响应及多个胁迫响应元件。GUS染色结果显示BpSPL8启动子可在拟南芥的下胚轴、叶片、叶柄、根和花序中启动GUS基因表达。BpSPL8基因可能在白桦叶片、叶柄、根和花序的发育中起作用,同时参与白桦对光响应、激素响应及胁迫响应。qRT-PCR分析BpSPL8基因在PEG处理下的野生型白桦的根和叶中均呈现先上调后下调的表达趋势,表明BpSPL8基因可能参与白桦对干旱胁迫的响应。因此,我们以过表达BpSPL8拟南芥为材料来... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

1BPSPzs启动子片段

动子段的获ＮＡ为模板，参照先前已获得的基因ｃＤＮＡ序列和基因ＰＣＲ扩增获得约２０００ｂｐ的启动子片段（图２－１），目的片段大小ＤＬ５０Ｗ?１?２?３??Ｍ—??图２－１办ＭＺＳ启动子片段??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?ｐｒｏｍｏｔｅｒ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｏｆ?ＢｐＳＰＬＳ??动子片段克隆载体构建??琼脂糖凝胶回收试剂盒回收ＰＣＲ目的片段与ｐＥＡＳＹ？－Ｂｌｕｎｔ?Ｃｌｏｎｉ后再转化大肠杆菌，经菌液ＰＣＲ鉴定我们获得了?５个阳性克隆（性克隆送至哈尔滨擎科生物科技有限公司测序。??ＤＬ５０００?１?２?３?４?５?６?＋?—??

根据测序结果利用Ｐｒｅｍｉｅｒ?５软件设计酶切引物，采用酶切连接的方法构建办??启动子表达载体转化大肠杆菌，经ＰＣＲ鉴定和再次测序确认后转化农杆菌，菌液ＰＣＲ??检测显示，重组表达载体已成功转化农杆菌（图２－３）。??ＤＬ５０００?１?２?３４?５?６?７?８＋?—??ｍｍＭｍ??图２－３表达载体转化农杆菌ＰＣ．Ｒ鉴定??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ?Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ?ＰＣＲ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ??２．３．５拟南芥遗传转化??通过农杆菌介导的浸染花法将办ＳＰＺＳ启动子表达载体转化野生型拟南芥，Ｔｉ种子??经卡那霉素抗性筛选，我们获得了极少的卡那霉素抗性植株（图２－４）。卡那抗性小苗移??至土壤中生长待成熟后，提取拟南芥叶片ＤＮＡ，经ＰＣＲ鉴定后，收集转基因种子，成??功转化的拟南芥命名为ＰｒｏＳＰＬ８：：ＧＵＳ。??ＤＬ５０００?１?２?３?＋?—??图２－４乃代植株卡那抗性植株??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｔｉ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ?ｐｌａｎｔ?Ｋａｎａ?ｒｅｓｉｓｔａｎｔ?ｐｌａｎｔｓ??２．３．６白桦ＳＰＺＳ启动子转基因拟南芥ＧＵＳ染色??选择开花期的转ＰｒｏＳＰＬ８：：ＧＵＳ拟南芥和野生型进行ＧＵＳ染色，结果如图２－６所??示，转ＰｒｏＳＰＬ８：：ＧＵＳ拟南芥的下胚轴、叶片、叶柄、根和花中（图２－５ｂ？ｆ）均呈现不??同程度的蓝色

【参考文献】：
期刊论文
[1]大豆GmbZIP16的抗旱功能验证及分析[J]. 赵婉莹,于太飞,杨军峰,刘沛,陈隽,陈明,周永斌,马有志,徐兆师,闵东红.  中国农业科学. 2018(15)
[2]干旱胁迫对喀斯特地区野生茶树幼苗生理特性及根系生长的影响[J]. 牛素贞,宋勤飞,樊卫国,陈正武.  生态学报. 2017(21)
[3]胡杨幼苗根系生长与构型对土壤水分的响应[J]. 吕爽,张现慧,张楠,夏延国,井家林,李景文.  西北植物学报. 2015(05)

硕士论文
[1]18个白桦SPLs基因的鉴定及BpSPL8基因的功能分析[D]. 刘闯.东北林业大学 2017
[2]白桦miR156及其靶基因BpSPL9的功能研究[D]. 申婷婷.东北林业大学 2017



本文编号：3563078