FABP3抑制肌浆网钙回收机制的研究

发布时间：2022-01-04 11:07

　　目的:本课题组前期报道心脏型脂肪酸结合蛋白（cardiac fatty acid binding protein,FABP3）可通过抑制小鼠心室肌细胞舒张期舒张过程中的钙再摄取（或钙回收）从而抑制心肌细胞收缩能力。但是,在现阶段FABP3抑制钙回收的详细机制尚不清楚。肌浆网钙离子泵（sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase,SERCA）是负责心脏舒张钙再摄取的主要蛋白质,已知SERCA的活性可以通过多种机制的调节。其中附属蛋白结合可能是主要机制。众所周知受磷蛋白PLB（phospholamban）可与SERCA结合,并且PKA（protein kinase A）介导的PLB磷酸化是导致PLB与SERCA解离并引起SERCA活化的主要机制。因此,本项目旨在进一步探索FABP3如何调节心肌细胞中SERCA的活性。方法:1.本实验使用饲养于SPF级环境中的健康C57BL/6小鼠,12-14周龄。2.免疫共沉淀,研究FABP3与PLB是否结合。3.通过钙成像技术研究小鼠左室心肌细胞钙瞬变的动力学变化。4.观察FABP3给药条件下心肌细胞钙瞬变变化。5... 

【文章来源】：河北医科大学河北省

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

FABP3促进PLB和SERCA之间的结合

20图1FABP3抑制小鼠心室肌细胞钙回收速率Fig.1FABP3inhibitscalciumrecoveryrateofmouseventricularmyocytes2.FABP3可以促进PLB和SERCA之间的结合由于PLB解离是SERCA活化的主要机制，接下来我们检验了FABP3是否参与调节PLB与SERCA的结合。急性分离小鼠心室肌细胞，获得心室肌细胞后，用5nmol/L的FABP3进行孵育细胞，然后进行免疫沉淀，结果表明与对照组相比，FABP3促进PLB和SERCA之间的结合（见图2）。该结果提示，FABP3有可能是通过促使PLB与SERCA的结合从而抑制SERCA活性，降低钙回收速率。图2FABP3促进PLB和SERCA之间的结合Fig.2FABP3promotestheconnectionbetweenPLBandSERCA*

213.FABP3对PLB的PKA磷酸化无影响，但显著改变PKA介导的RyR2磷酸化PKA介导的PLB磷酸化是调节PLB与SERCA亲和力的主要机制之一，而且我们前期的数据表明FABP3可以在细胞内局部增加PKA活性。因此接下来我们检验了FABP3是否影响PLB磷酸化水平。急性分离小鼠心室肌细胞，实验组用5nmol/L的FABP3孵育细胞30分钟，然后与对照组同时裂解，进行WesternBlot，运用统计学分析检测不同蛋白的表达情况。与对照组相比，实验组对PLB的16位点磷酸化无显著性影响（P=0.905）。作为阳性对照，我们同时检验了肌浆网钙释放通道RyR2磷酸化情况。我们发现FABP3孵育显著性升高RyR2的2808位点磷酸化（P<0.05）（见图3A，3B）。我们的数据提示，虽然FABP3可以激活PKA磷酸化通路，但是PLB磷酸化并未显著性受到FABP3影响。图3AFABP3对PKA介导的PLB磷酸化没有显著影响Fig.3AFABP3hasnosignificanteffectonPKA-mediatedPLBphosphorylation（n=3，P=0.905）


本文编号：3568223