黑水虻金属硫蛋白基因的鉴定及功能研究
发布时间：2022-01-15 01:40
黑水虻Hermetia illucens幼虫是重要的资源昆虫。一方面幼虫可以转化多种有机废弃物,另一方面幼虫富含脂质和蛋白质,可用作畜禽养殖和水产养殖的优质饲料。近年来研究发现黑水虻幼虫可以在高浓度的重金属环境中存活,因而可利用黑水虻来处理重金属污染的有机废弃物,如畜禽养殖场的粪便、重金属污染农田的农作物秸秆。有关黑水虻对重金属耐受性,人们已表征了其生物学参数,但分子机制还不清楚。本研究拟从金属硫蛋白基因的角度出发,探究其在黑水虻重金属耐受性中的作用。主要结果如下:1.黑水虻内参基因稳定性评价不同条件下内参基因的稳定性排序结果不同,在不同组织条件下EF1和Actin的稳定性最佳;不同发育阶段应选用Actin和RPL8;不同性别应选用Tubulin和RPL8。通过综合6个条件下的内参基因表达情况及Ref Finder计算结果,Actin和RP49的稳定性综合排名最高。2.黑水虻MT基因序列及表达模式分析从黑水虻幼虫转录组中克隆得到三个金属硫蛋白基因（BSFMT1、BSFMT2A和BSFMT2B）的c DNA序列。表达模式分析表明BSFMT1在整个幼虫阶段低表达,但在成虫与脂肪体中高表达。...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
黑水虻MT基因重组选用的酶切位点（黑色三角标示）
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文16表2-4黑水虻MT基因原核表达引物Table2-4PrimerforheterologousgeneexpressionofBSFMT图2-2pET-42a克隆载体结构图Fig.2-2ThestructureofpET-42avector注:本研究中选用的两个酶切位点由三角符号标注（SpeI和XhoI）。基因Gene引物序列(5’-3’)Primersequence(5’-3’)BSFMT1F:CATGACTAGTATGCCTTGTCCGGGATGTR:CTCACTCGAGTCAATCCTTCCTTCCTTGGCBSFMT2AF:CATGACTAGTATGGGTTGTCCAAAGTGR:CTCACTCGAGTTATTTACAGCATTTCTCTTTTBSFMT2BF:CATGACTAGTATGCCCTGCGGAGGTTR:CTCACTCGAGTCACTTCCCTTTGCAGCATT
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文22RT-qPCR分析8个候选内参基因在6种不同条件下的表达模式（Ct值对应内参基因的表达水平）。Ct值范围为16.96（GAPDH）到36.95（TBP），其中绝大部分Ct值在19到26之间。在这些基因中，RPL8（22.86），Actin（22.94）和RP49（22.10）是表达量最丰富的基因，在23个循环后就达到了荧光阈值，TBP（30.21）的表达水平最低（图3-1）。图3-1所有样品中内参基因的Ct值Fig.3-1Ctvaluesofcandidatereferencegenesintotalsamples3.1.2候选内参基因的稳定性分析为了分析内参基因在不同条件下的稳定性，将6个条件分为了生物学条件和非生物学条件两种，其中生物学条件包括不同发育阶段、不同组织和不同性别，非生物学条件包括不同浓度重金属、不同浓度抗生素、不同食物。首先对于不同发育阶段条件下，NormFinder的评估结果从高到低排名为：Actin、RPL8、Tubulin、GAPDH、EF1、ATP6V1A、RP49、TBP；BestKeeper的评估结果从高到低排名为：RP49、Tubulin、RPL8、GAPDH、Actin、TBP、ATP6V1A、EF1；geNorm的评估结果从高到低排名为：ATP6V1A=GAPDH、Actin、EF1、Tubulin、RPL8、RP49以及TBP；ΔCt的评估结果从高到低排名为：Actin、Tubulin、RPL8、GAPDH、EF1、ATP6V1A、RP49以及TBP（表3-1）。通过综合以上四种软件的分析结果，RefFinder结果表明Actin、Tubulin和GAPDH三个内参基因在生物学条件下稳定性排名前三，其中Actin在不同发育条件下的稳定性最好，TBP的稳定性最差（图3-2A）。
本文编号：3589639
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
黑水虻MT基因重组选用的酶切位点（黑色三角标示）
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文16表2-4黑水虻MT基因原核表达引物Table2-4PrimerforheterologousgeneexpressionofBSFMT图2-2pET-42a克隆载体结构图Fig.2-2ThestructureofpET-42avector注:本研究中选用的两个酶切位点由三角符号标注（SpeI和XhoI）。基因Gene引物序列(5’-3’)Primersequence(5’-3’)BSFMT1F:CATGACTAGTATGCCTTGTCCGGGATGTR:CTCACTCGAGTCAATCCTTCCTTCCTTGGCBSFMT2AF:CATGACTAGTATGGGTTGTCCAAAGTGR:CTCACTCGAGTTATTTACAGCATTTCTCTTTTBSFMT2BF:CATGACTAGTATGCCCTGCGGAGGTTR:CTCACTCGAGTCACTTCCCTTTGCAGCATT
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文22RT-qPCR分析8个候选内参基因在6种不同条件下的表达模式（Ct值对应内参基因的表达水平）。Ct值范围为16.96（GAPDH）到36.95（TBP），其中绝大部分Ct值在19到26之间。在这些基因中，RPL8（22.86），Actin（22.94）和RP49（22.10）是表达量最丰富的基因，在23个循环后就达到了荧光阈值，TBP（30.21）的表达水平最低（图3-1）。图3-1所有样品中内参基因的Ct值Fig.3-1Ctvaluesofcandidatereferencegenesintotalsamples3.1.2候选内参基因的稳定性分析为了分析内参基因在不同条件下的稳定性，将6个条件分为了生物学条件和非生物学条件两种，其中生物学条件包括不同发育阶段、不同组织和不同性别，非生物学条件包括不同浓度重金属、不同浓度抗生素、不同食物。首先对于不同发育阶段条件下，NormFinder的评估结果从高到低排名为：Actin、RPL8、Tubulin、GAPDH、EF1、ATP6V1A、RP49、TBP；BestKeeper的评估结果从高到低排名为：RP49、Tubulin、RPL8、GAPDH、Actin、TBP、ATP6V1A、EF1；geNorm的评估结果从高到低排名为：ATP6V1A=GAPDH、Actin、EF1、Tubulin、RPL8、RP49以及TBP；ΔCt的评估结果从高到低排名为：Actin、Tubulin、RPL8、GAPDH、EF1、ATP6V1A、RP49以及TBP（表3-1）。通过综合以上四种软件的分析结果，RefFinder结果表明Actin、Tubulin和GAPDH三个内参基因在生物学条件下稳定性排名前三，其中Actin在不同发育条件下的稳定性最好，TBP的稳定性最差（图3-2A）。
本文编号：3589639
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3589639.html
教材专著
