粟酒裂殖酵母中Ppr10蛋白的类PPR模体对线粒体蛋白影响的研究
发布时间：2022-02-15 02:06
线粒体拥有自身的基因组（mtDNA）,在粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe,S.pombe）中,mtDNA编码氧化磷酸化系统中的关键酶,因此mtDNA的正常表达对线粒体功能的发挥至关重要。PPR蛋白是一类主要调控细胞器基因表达的蛋白家族,粟酒裂殖酵母的Ppr10蛋白是PPR家族中的一员,主要参与mtDNA编码的呼吸链蛋白的合成,与线粒体的功能紧密相关。PPR模体是由35个连续排列的氨基酸组成的重复单位,Ppr10具有两个PPR模体,这两个模体对Ppr10正常发挥功能必不可少。利用蛋白结构预测软件HHrep ID进一步分析Ppr10的结构发现,该蛋白具有13个重复序列,这些序列均富含亮氨酸等疏水性氨基酸且不保守,与PPR模体特征相似,因此本文中将其命名为类PPR模体并对其功能进行研究。首先构建单个类PPR模体缺失菌并将其命名为ppr10?1-ppr10?13。表型研究结果表明,单个缺失类PPR模体1-7导致线粒体功能严重受损,而缺失类PPR模体8会部分影响线粒体功能或者影响不显著,且单个缺失类PPR模体1-7和10导致细胞在稳定期后期大量死亡。利用免疫印迹方...
【文章来源】：南京师范大学江苏省211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各类型PPR蛋白结构示意图[44]
第二章粟酒裂殖酵母中Ppr10类PPR模体缺失后表型的研究10图2.1菌种构建示意图A：Ppr10蛋白结构图；B：菌株的构建示意图；MTS：线粒体定位序列；PPR模体在7号和8号类PPR模体的位置。Figure2.1SchematicdiagramofstrainconstructionA:Ppr10proteinstructure;B:Schematicdiagramofstrainconstruction;MTS:mitochondriallocalizationsequence;PPRmotifislocatedatNo.7andNo.8repeat.2.1.2所用试剂及耗材蛋白胨、葡萄糖、琼脂粉、酵母粉、腺嘌呤、尿嘧啶、精氨酸、组氨酸均购自上海生工生物公司，PrimerStar酶、连接酶、各种限制性内切酶、鲑鱼精、潮霉素和RNaseA购自Sigma，引物合成及测序工作由上海生工生物公司完成，Tris、EDTA、NaOH、醋酸钠、醋酸锂及PEG购于丁贝公司，常用试剂及分析纯试剂购自国药试剂公司与上海生工生物公司。2.1.3培养基与试剂配制1.培养基（1）YES（YeastExtractwithsupplements）培养基（1L）葡萄糖（glucose）30g酵母粉（yeastextract）5g腺嘌呤（adenine）0.225g组氨酸（histidine）0.225g尿嘧啶（uracil）0.225g亮氨酸（leucine）0.225g
第二章粟酒裂殖酵母中Ppr10类PPR模体缺失后表型的研究132.1.4引物序列表2.1本章所用引物Table2.1Primersusedinthischapter引物名称引物序列ppr10-up-BamHICGCGGATCCATCTTTATAGCCCCAAAACTCppr10-13-U-dwTTTAATCTTAGATGCGAAGGTTTTTTCppr10-13-D-upGAAAAAACCTTCGCATCTAAGATTAAAACTCTGGATGAGATAGCS-13-dwTCGCTTATTTAGAAGTGGppr10-dw-SmaITCCCCCGGGATAGTTAAAGCATCTATAAACGACppr10-dw-cxCACCGTTAATTAACCCGGG2.1.5质粒图谱本章中所用的质粒为Pppr10-ppr10，该质粒由整合型质粒pJK148改造而来，该质粒的启动子为ppr10基因的自身启动子，目的片段插入到BamHI和SmaI两个酶切位点之间可将质粒上的ppr10基因置换从而得到想要的质粒。质粒图谱如图2.2所示。图2.2Pppr10-ppr10质粒示意图Figure2.2TheSchematicofPppr10-ppr10plasmidmap
本文编号：3625697
【文章来源】：南京师范大学江苏省211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各类型PPR蛋白结构示意图[44]
第二章粟酒裂殖酵母中Ppr10类PPR模体缺失后表型的研究10图2.1菌种构建示意图A：Ppr10蛋白结构图；B：菌株的构建示意图；MTS：线粒体定位序列；PPR模体在7号和8号类PPR模体的位置。Figure2.1SchematicdiagramofstrainconstructionA:Ppr10proteinstructure;B:Schematicdiagramofstrainconstruction;MTS:mitochondriallocalizationsequence;PPRmotifislocatedatNo.7andNo.8repeat.2.1.2所用试剂及耗材蛋白胨、葡萄糖、琼脂粉、酵母粉、腺嘌呤、尿嘧啶、精氨酸、组氨酸均购自上海生工生物公司，PrimerStar酶、连接酶、各种限制性内切酶、鲑鱼精、潮霉素和RNaseA购自Sigma，引物合成及测序工作由上海生工生物公司完成，Tris、EDTA、NaOH、醋酸钠、醋酸锂及PEG购于丁贝公司，常用试剂及分析纯试剂购自国药试剂公司与上海生工生物公司。2.1.3培养基与试剂配制1.培养基（1）YES（YeastExtractwithsupplements）培养基（1L）葡萄糖（glucose）30g酵母粉（yeastextract）5g腺嘌呤（adenine）0.225g组氨酸（histidine）0.225g尿嘧啶（uracil）0.225g亮氨酸（leucine）0.225g
第二章粟酒裂殖酵母中Ppr10类PPR模体缺失后表型的研究132.1.4引物序列表2.1本章所用引物Table2.1Primersusedinthischapter引物名称引物序列ppr10-up-BamHICGCGGATCCATCTTTATAGCCCCAAAACTCppr10-13-U-dwTTTAATCTTAGATGCGAAGGTTTTTTCppr10-13-D-upGAAAAAACCTTCGCATCTAAGATTAAAACTCTGGATGAGATAGCS-13-dwTCGCTTATTTAGAAGTGGppr10-dw-SmaITCCCCCGGGATAGTTAAAGCATCTATAAACGACppr10-dw-cxCACCGTTAATTAACCCGGG2.1.5质粒图谱本章中所用的质粒为Pppr10-ppr10，该质粒由整合型质粒pJK148改造而来，该质粒的启动子为ppr10基因的自身启动子，目的片段插入到BamHI和SmaI两个酶切位点之间可将质粒上的ppr10基因置换从而得到想要的质粒。质粒图谱如图2.2所示。图2.2Pppr10-ppr10质粒示意图Figure2.2TheSchematicofPppr10-ppr10plasmidmap
本文编号：3625697
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