人溶菌酶在毕赤酵母中的表达及体外抑菌活性研究

发布时间：2022-02-16 12:18

　　对重组人溶菌酶真核表达载体的构建筛选、表达与活性鉴定,经过双酶切和测序鉴定表明,重组载体正确。电转化毕赤酵母GWDL菌株,通过G418抗性平板筛选得到高表达高效价菌株,经诱导表达,检测蛋白含量,体外抑菌检测,表达产物15 ku和预期结果一致,筛选得到效价为1 907 U/mL,编号为SMD1168-pPIC9k-HLZ的高效价菌株;采用重组人溶菌酶制剂,检测样品GWDL对5种菌的最小抑菌浓度（MIC）,藤黄微球菌的最小抑菌浓度较好,表明重组人溶菌酶在毕赤酵母中成功表达,活性较为稳定。 

【文章来源】：安徽农业科学. 2020,48(04)

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
    1.2 主要仪器设备
    1.3 引物设计与合成
    1.4 人外周血淋巴细胞总RNA的提取及cDNA模板的克隆
    1.5 人溶菌酶基因序列的PCR扩增
    1.6 人溶菌酶真核表达载体的构建与鉴定
    1.7 重组质粒对毕赤酵母SMD1168的转化及筛选
    1.8 人溶菌酶的诱导表达及检测
    1.9 重组酵母表达人溶菌酶抑菌活性测定
        1.9.1 重组人溶菌酶抑菌效价测定。
        1.9.2 重组人溶菌酶制剂对体外常见致病菌的最小抑菌浓度测定。
2 结果与分析
    2.1 人溶菌酶基因序列的PCR扩增
    2.2 人溶菌酶真核表达载体的构建与鉴定
    2.3 重组质粒对毕赤酵母SMD1168的转化及筛选
    2.4 表达蛋白的电泳检测
    2.5 抑菌活性检测
    2.6 重组人溶菌酶制剂对体外常见致病菌的最小抑菌浓度测定
3 结论与讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]人溶菌酶重组酵母工程菌的构建和活性干粉的制备[J]. 齐小雨,陈熙,张炜.  江苏农业学报. 2016(05)
[2]溶菌酶替代抗生素的研究进展[J]. 夏宇.  现代畜牧兽医. 2016(05)
[3]溶菌酶及其分子改造研究进展[J]. 温赛,刘怀然,续丹丹.  中国生物工程杂志. 2015(08)
[4]人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性检测[J]. 夏清风,侯英敏,曹芳,金朝霞.  大连工业大学学报. 2011(05)
[5]在毕赤酵母中表达人溶菌酶蛋白的研究[J]. 胡乔,赵凌侠,唐克轩.  上海交通大学学报(农业科学版). 2008(03)
[6]人源抗菌肽LL-37在毕赤酵母中的高效表达及其活性检测[J]. 申艳敏,魏建超,尚书文,牛明福,周玉珍,周斌,曹瑞兵,陈溥言,侯继波.  微生物学通报. 2008(04)
[7]人溶菌酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达[J]. 贾向志,袁汉英,马文煜,李元,李育阳.  第四军医大学学报. 2001(22)

博士论文
[1]基于人工智能和代谢调控的典型好氧发酵过程在线控制和故障诊断[D]. 丁健.江南大学 2014

硕士论文
[1]巴斯德毕赤酵母发酵生产重组人溶菌酶研究[D]. 陈晶晶.北京化工大学 2006



本文编号：3627954