不同分子伴侣活性对新生肽链的影响

发布时间：2022-02-20 12:39

　　Trigger Factor（TF）是大肠杆菌中具有核糖体结合位点的分子伴侣。作为新生肽链合成后遇到的第一个分子伴侣,TF执行着协助蛋白质正确折叠这一重要功能,在原核生物分子伴侣网络中占据极其重要的地位。TF具有foldase、unfoldase和holdase三种分子伴侣活性,各种活性之间以不同程度作用于新生肽链,帮助后者进行折叠。本课题将通过构建具有不同分子伴侣活性的,能够与核糖体结合的分子伴侣,并检测其性质,从而探究三种分子伴侣活性各自对肽链折叠所产生的影响。本课题选取Dna K、Clp B、Dna J和Skp四种具有不同活性的分子伴侣作为改造对象,将TF的N结构域连接到这四种分子伴侣中,构建出具有核糖体结合位点的不同分子伴侣活性的融合蛋白NTF-Dna K、NTF-Clp B、NTF-Dna J和NTF-Skp,并通过蛋白诱导表达和纯化,得到了目的蛋白。之后,本研究对融合蛋白进行了分子伴侣活性和结构性质检测,结果表明TF的N结构域的存在不会对所制备的融合蛋白的活性产生影响。与此同时,本研究还对TF及其他分子伴侣的单基因敲除菌株的转录组、蛋白质组、表型数据进行了分析,发现具有多种... 

【文章来源】：哈尔滨工业大学黑龙江省211工程院校985工程院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 分子伴侣与蛋白质折叠
    1.2 核糖体结合分子伴侣
    1.3 Trigger Factor的结构组成及功能
    1.4 不同分子伴侣间的相互作用
    1.5 课题研究内容及研究意义
    1.6 本文技术路线
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 原核表达系统
        2.1.2 主要试剂及溶液的制备
        2.1.3 主要实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 目的质粒构建
        2.2.2 蛋白的诱导表达和纯化
        2.2.3 蛋白活性测定
第3章 不同特性的分子伴侣的制备和表征
    3.1 目的蛋白的制备
        3.1.1 目的蛋白的选择
        3.1.2 构建不同特性的分子伴侣质粒
        3.1.3 蛋白的诱导表达与纯化
    3.2 目的蛋白的光谱表征
    3.3 目的蛋白的活性检测
        3.3.1 N_(TF)-DnaK及 DnaK的活性检测
        3.3.2 N_(TF)-ClpB及 ClpB的活性检测
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
第4章 TF不同特性的分子伴侣生理功能分析
    4.1 TF敲除对基因表达的影响
        4.1.1 TF敲除对基因转录水平表达的影响
        4.1.2 TF敲除对基因蛋白水平表达的影响
        4.1.3 Δtig菌株在转录水平和蛋白水平表达的比较
    4.2 DnaK敲除对基因表达的影响
        4.2.1 DnaK敲除对基因转录水平表达的影响
        4.2.2 DnaK敲除对基因蛋白水平表达的影响
        4.2.3 Δtig菌株和Δdna K菌株转录水平表达的比较
        4.2.4 Δtig菌株和Δdna K菌株蛋白水平表达的比较
    4.3 ClpB蛋白组学分析
        4.3.1 ClpB底物类型分析
        4.3.2 TF与 ClpB组学数据差异分析
    4.4 Skp蛋白组学分析
        4.4.1 Skp底物类型分析
        4.4.2 TF与Skp组学数据差异分析
    4.5 单基因敲除菌株的表型变化
    4.6 讨论
    4.7 本章小结
结论
展望
参考文献
致谢



本文编号：3635066