香樟甲羟戊酸-5-磷酸激酶基因CcPMK的克隆和表达分析

发布时间：2022-02-26 14:03

　　甲羟戊酸-5-磷酸激酶（5-phosphomevalonate kinase,PMK）是甲羟戊酸（mevalonate,MVA）途径中的关键限速酶,其在ATP和二价金属离子的存在下能够可逆地催化甲羟戊酸-5-磷酸（mevalerate 5-phosphoric acid,MVAP）磷酸化从而形成甲羟戊酸-5-焦磷酸（mevalonate-5-pyrophosphate,MVAPP）。该文以香樟Cinnamomum camphora作为研究材料,基于前期的转录组数据,从cDNA中克隆出PMK基因,命名为CcPMK（GenBank登录号MN163057）。该基因开放阅读框（ORF）为1 545 bp,编码514个氨基酸,生物信息学分析推测其相对分子质量为56.14 kDa,等电点（theoretical pI）为7.64,不含信号肽,不存在跨膜结构。通过多序列比对及系统进化树分析,发现CcPMK与其他植物的PMK氨基酸序列相似性高达75%,其包含45%的α-螺旋和16%的β折叠,CcPMK具有3个PMK蛋白质家族的特征motif和1个ATP结合位点Gly-Leu-Gly-Ser-Ser-A... 

【文章来源】：中国中药杂志. 2020,45(01)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 植物
    1.2 仪器
    1.3 试剂
2 方法
    2.1 总RNA的提取
    2.2 cDNA的合成
    2.3 cDNA全长的获得
    2.4 克隆载体的构建、转化及鉴定
    2.5 生物信息学分析
    2.6 qRT-PCR检测
3 结果
    3.1 总RNA的提取及检测
    3.2 CcPMK基因cDNA全长的克隆
    3.3 CcPMK蛋白的生物信息学分析
        3.3.1 理化性质分析
        3.3.2 序列比对及结构域分析
        3.3.3 系统进化树的构建
    3.4 CcPMK基因的特异性表达分析
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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[2]香樟GGPPS基因的克隆及生物信息学分析[J]. 曹先爽,王进,张瑶瑶,王煜炜,马晓江,宋丽,汤锋,岳永德.  基因组学与应用生物学. 2018(08)
[3]香樟FPPS基因的克隆及生物信息学分析[J]. 张瑶瑶,宋丽,刘伟,曹先爽,王煜炜,王进.  分子植物育种. 2018(19)
[4]梅州香樟挥发油抗炎活性试验[J]. 叶小玲,赵莹,张声源,张伟楠,饶颂华,聂华.  广东化工. 2018(08)
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[9]金钗石斛焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶基因的克隆及表达分析[J]. 李清,李标,郭顺星.  基因组学与应用生物学. 2018(02)
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硕士论文
[1]茯苓磷酸甲羟戊酸激酶基因克隆及功能分析[D]. 何海.华中农业大学 2016



本文编号：3644626