日本七鳃鳗Syk分子的重组表达以及相关免疫学研究

发布时间：2022-07-07 13:37

　　Syk是一种蛋白酪氨酸激酶,由629个氨基酸所组成,主要参与机体内多种信号通路的信号传导。以往对于Syk的研究大多选取高等哺乳动物为实验对象,而到目前为止Syk在低等脊椎动物中的研究少之甚少,由于七鳃鳗不仅是现存的低等无颌类脊椎动物的重要代表,而且还是无脊椎动物向脊椎动物进化过程中具有承上启下意义的一个重要类群。因此,本文选取七鳃鳗这种无颌类脊椎动物为研究实验对象,探索Lja-Syk分子在七鳃鳗免疫应答过程中的作用。其目的在于既可以揭示Lja-Syk分子从低等到高等脊椎动物的分子进化进程,也进一步为深入了解无颌类脊椎动物免疫应答的分子机制奠定了实验基础。在本实验的研究基础之上,对Syk截短序列构建表达载体进行诱导表达,纯化后得到Lja-Syk的可溶性重组蛋白。随后以重组蛋白Lja-Syk为抗原,通过对新西兰兔（Oryctolagus cuniculus）进行皮下多点注射免疫,制备Lja-Syk的兔源多克隆抗体。通过ELISA方法检测分析,在第三次加强免疫后检测,抗体的效价能达到1:521 000。纯化后的抗体经免疫印迹实验检测其对Lja-Syk重组蛋白以及天然蛋白都有较强的特异性。为了... 

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 Syk的分子结构特点
    1.2 Syk与癌症的关系
        1.2.1 Syk与卵巢癌的关系
        1.2.2 Syk与胃癌的关系
    1.3 Syk与白血病的关系
        1.3.1 Syk与慢性淋巴细胞白血病的关系
        1.3.2 Syk与急型髓系白血病的关系
    1.4 小结
第2章 七鳃鳗Lja-Syk分子的诱导表达及蛋白纯化
    2.1 材料
    2.2 方法
        2.2.1 目的基因的蛋白诱导表达
        2.2.2 可溶性蛋白鉴定
        2.2.3 SDS-PAGE鉴定
        2.2.4 目的蛋白纯化
        2.2.5 蛋白浓度的测定
    2.3 结果
        2.3.1 重组蛋白Lja-Syk的诱导表达
        2.3.2 纯化后的重组蛋白Lja-Syk
        2.3.3 Lja-Syk重组蛋白质谱分析
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 七鳃鳗Lja-Syk多克隆抗体制备及其鉴定
    3.1 材料
    3.2 方法
        3.2.1 免疫方法
        3.2.2 免疫印迹法(WB)检测Lja-Syk多克隆抗体的效价
        3.2.3 Lja-Syk多克隆抗体的纯化
    3.3 结果
        3.3.1 ELISA法检测兔源Lja-Syk多克隆抗体的效价
        3.3.2 免疫印迹技术检测Lja-Syk多克隆抗体的特异性
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 七鳃鳗Lja-Syk相关的免疫学研究
    4.1 七鳃鳗Lja-Syk在 mRNA水平上在各组织中的相对表达量
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
        4.1.3 结果
    4.2 七鳃鳗Syk在蛋白水平上在各组织中的相对表达量
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
        4.2.3 结果
    4.3 讨论
    4.4 小结
第5章 Lja-Syk基因的siRNA干扰初探
    5.1 siRNA干扰Lja-Syk在七鳃鳗中mRNA水平上各组织中的相对表达量
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
        5.1.3 结果
    5.2 siRNA干扰Lja-Syk在七鳃鳗中蛋白水平水平上各组织中的相对表达量
        5.2.1 材料
        5.2.2 方法
        5.2.3 结果
    5.3 讨论
    5.4 小结
结论
本文创新点
参考文献
附录 A 七鳃鳗Syk mRNA全序列
附录 B 重组蛋白纯化后的蛋白浓度曲线
附录 C 抗体纯化后的抗体浓度曲线
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Correlation of tumor-positive ratio and number of perigastric lymph nodes with prognosis of patients with surgically-removed gastric carcinoma[J]. Yong-Bin Ding Guo-Yu Chen Jian-Guo Xia Xi-Wei Zang Hong-Yu Yang Li Yang Department of General Surgery,First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210029,Jiangsu Province,ChinaYue-Xian Liu Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210029,Jiangsu Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2004(02)



本文编号：3656516