棉铃虫葡萄糖氧化酶HaGOX在毕赤酵母中的重组表达和性质研究

发布时间：2022-10-03 16:02

　　毕赤酵母是使用最广泛、最具有发展前景的异源蛋白表达系统之一。在毕赤酵母GS115中实现了来源于棉铃虫（Helicoverpa armigera）葡萄糖氧化酶基因hagox的异源表达。以棉铃虫hagox基因连接pPICZαA质粒构建重组表达载体,电击转化毕赤酵母GS115H菌株后得到含有hagox基因的重组酵母菌株。通过平板显色、酶活力测定和SDS-PAGE分析,重组酵母中HaGOX成功表达。HaGOX含606个氨基酸,理论分子量66.9 kD,预测等电点pH 4.78。经测试重组HaGOX的最适pH为6.0～7.0,最适温度为40℃,对6-脱氧-葡萄糖和D-葡萄糖具有高催化活力,以D-葡萄糖为底物的比活力为13.63 U·mg^-1,对其他吡喃糖和二糖没有催化活力。 

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
        1.1.1 棉铃虫、菌株与质粒
        1.1.2 试剂与仪器
        1.1.3 培养基
            ①YPDZ培养基:
            ②10×酵母无氨基氮源(YNB):
            ③500×生物素:
            ④PTM1微量盐:
            ⑤酵母发酵盐基础培养基:
            ⑥酵母发酵盐诱导培养基:
    1.2 试验方法
        1.2.1 棉铃虫葡萄糖氧化酶基因hagox克隆
        1.2.2 重组表达载体pPICZαA/HaGOX的构建及基因序列分析
        1.2.3 重组表达载体pPICZαA/HaGOX转化酵母及诱导表达
        1.2.4 重组HaGOX蛋白的纯化
        1.2.5 酶蛋白浓度测定
        1.2.6 葡萄糖氧化酶活力的测定
        1.2.7 重组HaGOX酶学性质测定
2 结果与分析
    2.1 重组HaGOX酵母表达载体的构建及hagox基因分析
    2.2 重组葡萄糖氧化酶HaGOX的表达分析
    2.3 HaGOX酶学性质分析
        2.3.1 温度和pH对酶活的影响
        2.3.2 金属离子及化学试剂对HaGOX酶活力的影响
        2.3.3 HaGOX的底物特异性分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]葡萄糖氧化酶在植食性昆虫与寄主植物互作中的作用[J]. 杨丽红,白素芬.  河南科学. 2016(05)
[2]蚯蚓葡萄糖氧化酶的提取纯化研究[J]. 李娇,原琳,荣永海,荣龙.  天然产物研究与开发. 2015(08)
[3]葡萄糖氧化酶在饲料工业中的应用研究进展[J]. 吴晓娟,林亲录,吴伟.  粮食与饲料工业. 2014(07)
[4]微生物葡萄糖氧化酶的生产及其在食品工业中应用的研究进展[J]. 朱运平,伍少明,李秀婷,肖林,滕超,褚文丹.  中国食品添加剂. 2013(05)
[5]葡萄糖生物传感器检测方法的研究进展[J]. 杨秀云,梁凤,张巍,胡连哲,MAJEED Saadat,李云辉,徐国宝.  应用化学. 2012(12)
[6]重组葡萄糖氧化酶毕赤酵母高产菌株的高通量快速筛选方法[J]. 周利伟,郜赵伟,张宇宏,张伟.  中国农学通报. 2012(21)
[7]葡萄糖氧化酶的生产及应用[J]. 邢良英,王远山,郑裕国.  食品科技. 2007(06)
[8]棉铃虫幼虫中肠主要蛋白酶活性的鉴定[J]. 王琛柱，钦俊德.  昆虫学报. 1996(01)



本文编号：3684369