PGC7对其互作蛋白STAT1的磷酸化调控及在F9细胞多能性中的作用

发布时间：2022-10-21 17:51

　　PGC7是一个在哺乳动物生殖细胞、卵母细胞、植入前胚胎和多能性细胞中特异表达的母源效应因子。PGC7的表达状态与小鼠ES细胞的多能性水平有关,PGC7的高表达水平也有助于维持胚胎干细胞和内细胞团的低甲基化水平,这些结果表明PGC7在维持细胞多能性方面发挥重要作用。Nanog由305个氨基酸组成,具有保守的同源异型结构域,在小鼠植入前胚胎和ES细胞等多能性细胞中特异性表达,随着细胞多能性下降而表达量降低,表明Nanog对于多能性的维持存在剂量效应,并且表达水平与细胞分化程度和多能性层次密切相关。STAT家族蛋白包括STAT1-4、STAT5a、STAT5b和STAT6,已经有研究表明STAT家族蛋白对胚胎干细胞多能性的调控存在贡献。LIF/gp130/STAT3信号通路是发现最早的小鼠ES细胞多潜能性维持通路,LIF通过激活STAT3来调控靶基因表达,抑制ES细胞的分化,从而维持小鼠ES细胞的多能性状态。我们的前期研究发现一种独立于LIF-JAK-STAT3的新的途径,即Vc可以激活JAK2/STAT2信号传导途径,而活化的STAT2结合到Nanog启动子的近端区域并在ESC中促进Nan... 

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 PGC7 的生物学功能及研究进展
        1.1.1 PGC7 的生物学特征
        1.1.2 PGC7 在早期胚胎发育中的作用
        1.1.3 PGC7在DNA甲基化调控中的作用
        1.1.4 PGC7 在染色质调控中的作用
        1.1.5 PGC7 在多能性中的作用
    1.2 STAT家族蛋白研究进展
        1.2.1 STAT家族蛋白概述
        1.2.2 STAT家族蛋白在调控细胞多能性中的作用
第二章 PGC7与STAT1 互作验证及对STAT1 细胞定位的影响
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 仪器与耗材
        2.1.4 主要溶液配制
        2.1.5 细胞培养与传代
        2.1.6 总RNA提取与反转录
        2.1.7 STAT1 标签表达载体构建载体构建
        2.1.8 细胞转染
        2.1.9 免疫印迹(Western Blot,WB)
        2.1.10 蛋白质免疫共沉淀(Co-iP)
        2.1.11 免疫荧光染色
    2.2 结果
        2.2.1 STAT1 真核表达载体构建
        2.2.2 PGC7与STAT1 的互作验证
        2.2.3 STAT1 结构域分析
        2.2.4 STAT1 及其截短体真核表达载体构建
        2.2.5 PGC7与STAT1 互作结构域分析
        2.2.6 PGC7与STAT1 的细胞内共定位
        2.2.7 PGC7与STAT1 截短体的细胞内共定位
        2.2.8 PGC7对STAT1 的磷酸化水平的影响
    2.3 讨论
    2.4 小结
第三章 PGC7 激活STAT1 的活性
    3.1 材料与方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 仪器与耗材
        3.1.4 主要溶液配制
        3.1.5 细胞培养与传代
        3.1.6 总RNA提取与反转录
        3.1.7 PTPN6a表达载体构建
        3.1.8 细胞转染
        3.1.9 蛋白质免疫共沉淀(Co-Ip)
        3.1.10 双荧光素酶报告实验
    3.2 结果
        3.2.1 PTPN6a真核表达载体构建
        3.2.2 磷酸化修饰蛋白的免疫印迹法(Phosphorylated Western Blot)
        3.2.3 蛋白质免疫共沉淀检测PGC7 对于PTPN6a与 STAT1 的互作影响
        3.2.4 双荧光素酶报告实验检测ISRE报告载体活性
    3.3 讨论
    3.4 小结
第四章 PGC7与STAT1 的互作参与胚胎干细胞多能性维持
    4.1 材料与方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 仪器与耗材
        4.1.4 主要溶液配制
        4.1.5 细胞培养与传代
        4.1.6 双荧光素酶报告实验
        4.1.8 SYBR实时荧光定量
        4.1.9 AP染色(Alkaline phosphatase staining)
    4.2 结果
        4.2.1 PGC7与STAT1 对于Nanog启动子活性的影响
        4.2.2 PGC7与STAT1 对于Nanog和 OCT4 基因表达水平的影响
        4.2.3 PGC7与STAT1 对于F9 细胞整体多能性水平的影响
    4.3 讨论
    4.4 小结
第五章 结论
参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]胚胎干细胞多潜能性维持的分子机制[J]. 王庆忠,刘以训,韩春生.  科学通报. 2005(15)

博士论文
[1]PGC7互作蛋白的鉴定及功能研究[D]. 刘红亮.西北农林科技大学 2017



本文编号：3696106