农杆菌介导的eGFP基因转化瓜叶菊技术体系的建立

发布时间：2022-10-30 19:59

　　为了建立稳定、高效的瓜叶菊遗传转化体系,本试验以瓜叶菊无菌苗茎段作为外植体,采用农杆菌EHA105介导法转化eGFP基因。探讨了不同菌液浓度,共培养时间,硫酸卡那霉素（Kan）和特美汀（Tim）浓度,乙酰丁香酮（AS）和表面活性剂Silwet L-77浓度,以及浸泡时间、超声波和真空渗入处理对外植体生长与转化率的影响。结果表明:在瓜叶菊叶片中成功检测到eGFP基因的瞬时表达,农杆菌菌液OD600为1.0,共培养3 d时最有利于农杆菌与外植体的融合生长;40 mg/L Kan和200 mg/L Tim可以分别作为有效的外植体筛选压和抑菌浓度;100μmol/L AS和0.03%Silwet L-77能有效地诱导愈伤组织和提高转化率;浸泡30 min、超声波60 s和真空渗入30 s都能促进愈伤组织的形成及提高转化率。 

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 e GFP基因的瞬时表达
    1.2 菌液浓度对外植体共培养的影响
    1.3 共培养时间对转化外植体及农杆菌生长的影响
    1.4 Kan及Tim培养基浓度对外植体生长的影响
    1.5 菌液中AS和Silwet L-77浓度对外植体愈伤组织诱导与转化率的影响
    1.6 菌液浸泡时间对外植体存活率与转化率的影响
    1.7 超声波和真空渗入处理对外植的影响
2 讨论
    2.1 农杆菌菌液浓度对遗传转化的影响
    2.2 共培养时间对遗传转化的影响
    2.3 Kan及Tim浓度对遗传转化的影响
    2.4 AS和Silwet L-77浓度对遗传转化的影响
    2.5 浸泡时间、超声波和真空渗入对遗传转化的影响
3 材料与方法
    3.1 试验材料
    3.2 p KSE402-e GFP基因质粒扩增及转化大肠杆菌
    3.3 农杆菌EHA105菌液制备
    3.4 菌液浓度OD600值筛选
    3.5 共培养时间对外植体的转化
    3.6 Kan及Tim培养基的浓度筛选
    3.7 AS和Silwet L-77的浓度筛选
    3.8 菌液浸泡时间对外植体转化试验
    3.9 超声波和真空渗入法转化外植体试验
作者贡献


【参考文献】：
期刊论文
[1]马铃薯遗传转化体系的优化建立及其主要影响因素[J]. 张西英,张爱萍,刘江娜.  基因组学与应用生物学. 2019(07)
[2]Transient expression of the enhanced green fluorescent protein（egfp） gene in Sargassum horneri[J]. PANG Yunlong,LI Yan,LIU Zhengyi,CUI Yulin,QIN Song.  Journal of Oceanology and Limnology. 2019(02)
[3]露地菊脚芽农杆菌真空渗透转化技术体系的建立[J]. 王羽晗,李子豪,李世彪,陈驰航,王瑜麟,吴雅妮,张旸.  南方农业学报. 2018(11)
[4]农杆菌介导高粱遗传转化的相关因素优化[J]. 张微,王良群,刘勇,郝艳芳,杨伟,白鸿雁,武擘.  作物杂志. 2018(01)
[5]瓜叶菊‘大花’Mlo基因RNAi载体的构建及其遗传转化研究[J]. 王丹,王金刚.  河北农业大学学报. 2016(06)
[6]农杆菌介导甘蔗梢腐病病原菌YN41的遗传转化[J]. 郭强,王鑫,徐世强,王继华,崔一平,张木清.  基因组学与应用生物学. 2016(05)
[7]超声波辅助农杆菌转化OT百合‘罗宾娜’的研究[J]. 王岚,刘雅莉,娄倩,田菲菲.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(06)
[8]共培养环境对玉米遗传转化的影响[J]. 王宏伟,梁业红,史振声,张世煌.  西北农业学报. 2011(09)
[9]真空辅助农杆菌介导中华猕猴桃高效遗传转化体系的建立[J]. 尚霄丽,冯建灿,朱道圩,邢东方,马春华.  中国细胞生物学学报. 2010(01)
[10]根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化体系的建立[J]. 郝彦玲,朱本忠,朱鸿亮,栾春光,罗云波,段晓昱.  农业生物技术学报. 2005(06)

硕士论文
[1]‘突尼斯软子’石榴遗传转化体系建立及转化ICE1基因的研究[D]. 赵玉洁.河南农业大学 2017



本文编号：3699389