PTPN2通过抑制STAT3磷酸化抑制小鼠胚胎干细胞的自我更新

发布时间：2022-12-25 17:02

　　在小鼠胚胎干细胞中添加细胞白血病抑制因子（Leukemia Inhibitory Factor,LIF）能够触发STAT3蛋白上第705位的酪氨酸的磷酸化,此位点的磷酸化可以激活STAT3,促使STAT3进入到细胞核内,从而与它靶基因结合并激活它们的表达,最终维持小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cells mESCs）的自我更新状态;此外,很多研究者们也都发现将STAT3及其靶基因过表达后,在添加LIF,CHIR99021和PD0325901的条件下,能够将分离自着床后的小鼠上胚层干细胞（Epiblast stem cells,EpiSCs）诱导重编程回到mESCs状态。STAT3主要在经典通路Janus途径中发挥作用,所以STAT3蛋白第705位的酪氨酸的磷酸化是主要通过Janus激酶途径来实现的。虽然目前关于STAT3基因在mESCs中的功能虽然有很多报道,但与其相互作用的蛋白的却未鉴定出来。过表达STAT3可以替代LIF的功能,从而维持mESCs在未分化状态,我们的研究发现:在过表达基因STAT3的细胞系中上调PTPN2（protein tyrosine... 

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摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 胚胎早期发育
    1.2 胚胎干细胞
    1.3 胚胎干细胞的研究进展
    1.4 LIF/STAT3信号通路
    1.5 蛋白酪氨酸磷酸酶家族(ProteinTyrosine Phosphatase,PTP家族)
    1.6 本研究的目的和意义
第二章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验所需仪器
        2.1.2 实验所需试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠胚胎干细胞和上胚层干细胞的培养
        2.2.2 质粒构建
        2.2.3 过表达质粒导入细胞
        2.2.4 293FT细胞的培养
        2.2.5 病毒转染质粒的敲低方法
        2.2.6 小鼠胚胎干细胞碱性磷酸酶(AP)活性的检测
        2.2.7 蛋白质印迹(免疫印迹实验,Western bloting)
        2.2.8 免疫共沉淀(CO-IP)
        2.2.9 免疫萤光染色
        2.2.10 定量RT-PCR(qRT-PCR)
        2.2.11 小鼠胚胎干细胞的冻存
        2.2.12 小鼠胚胎干细胞的复苏
        2.2.13 质粒的转化
第三章 实验结果
    3.1. 小鼠胚胎干细胞mESCs中STAT3相互作用蛋白的鉴定
        3.1.1 PTPN2被筛选出可能与STAT3存在相互作用
        3.1.2 PTPN2与STAT3蛋白间互相作用的验证
    3.2 过表达的PTPN2是通过降低STAT3pY705来促进mESC的分化
        3.2.1 过表达PTPN2对小鼠胚胎干细胞多能性基因的影响
        3.2.2 PTPN2的过表达对STAT3磷酸化的影响
        3.2.3 PTPN2与STAT3蛋白的结合主要发生在在细胞核
    3.3 降低PTPN2的表达能够延迟小鼠胚胎干细胞的分化
        3.3.1 敲低PTPN2的表达对小鼠胚胎干细胞的影响
        3.3.2 敲除PTPN2的表达对小鼠胚胎干细胞的影响
    3.4 在过表达STAT3的上胚层干细胞中抑制PTPN2基因的表达可以促进上胚层干细胞的重编程
        3.4.1 在小鼠上胚层干细胞中降低PTPN2的含量对STAT3介导的重编程能力的影响
        3.4.2 在小鼠上胚层干细胞中过表达PTPN2的含量对STAT3介导的重编程能力的影响
第四章 讨论与展望
    4.1 讨论
    4.2 展望
参考文献
附图
致谢
攻读硕士期间发表论文



本文编号：3727008