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黄翅大白蚁肠道固氮菌和放线菌的分离与鉴定

发布时间:2023-03-21 11:32
  白蚁(蜚蠊目,昆虫纲)是一种社会性昆虫,主要食木头、凋落物或腐殖质,这些食物富含木质纤维素且含氮量少,白蚁肠道微生物在木质纤维素降解和生物固氮中起着重要作用。培菌白蚁是一类特殊的白蚁,专一性培育鸡枞菌。培菌白蚁和菌圃真菌易受多种真菌侵染,但在健康的白蚁蚁巢中,菌圃上只生长鸡枞菌,白蚁或其共生菌存在一定的机制来抵制致病菌,其中放线菌作为天然产物主要产生者,可能起着关键的作用。为探究培菌白蚁肠道微生物的固氮和防御作用,我们以黄翅大白蚁Macrotermesbarney 为研究材料,对其肠道固氮微生物和放线菌展开了研究。首先,以M.barneyi工蚁肠道为样品,在不含氮源的培养基筛选微生物,通过16S rRNA序列比对鉴定菌种。我们从无氮培养基上分离到8株菌,它们属于沙雷氏菌属、芽孢杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属、沙门氏菌属和Kosakonia属,部分菌株报道有固氮活性或固氮基因。除芽孢杆菌属于厚壁菌门外,其他菌株都属于变形菌门。这一研究为了解培菌白蚁的固氮机制提供了菌种材料。然后,以M.barneyi工蚁前、中肠为样品,在高氏一号培养基上分离得到13株放线菌。通过形态观察和分子生物学鉴定,...

【文章页数】:93 页

【学位级别】:硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略语
第一章 前言
    1.1 白蚁及其肠道微生物
        1.1.1 白蚁肠道微生物对木质纤维素的降解作用
        1.1.2 白蚁肠道微生物的固氮作用
        1.1.3 白蚁肠道微生物的防御作用
        1.1.4 白蚁肠道微生物的其他作用
    1.2 培菌昆虫概述
        1.2.1 培菌蚂蚁
        1.2.2 培菌甲虫
        1.2.3 培菌白蚁
    1.3 培菌昆虫相关放线菌天然产物研究
        1.3.1 多肽类化合物
        1.3.2 醌酮类化合物
        1.3.3 多烯类化合物
        1.3.4 生物碱类化合物
        1.3.5 其他类化合物
    1.4 本文的立题依据和研究内容
        1.4.1 立题依据
        1.4.2 研究内容
第二章 黄翅大白蚁肠道固氮微生物的分离与鉴定
    2.1 背景
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验试剂
        2.2.2 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 白蚁的解剖
        2.3.2 微生物的分离
        2.3.3 微生物的鉴定
        2.3.4 微生物的生理生化性质分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 菌株的分离与鉴定
        2.4.2 菌株的生理生化性质
    2.5 小结和讨论
第三章 黄翅大白蚁肠道放线菌的分离
    3.1 背景
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验试剂
        3.2.2 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 白蚁的解剖
        3.3.2 放线菌的分离
        3.3.3 放线菌的鉴定
        3.3.4 放线菌抑菌活性的测定
    3.4 实验结果
        3.4.1 放线菌的分离与鉴定
        3.4.2 放线菌培养上清的抑菌活性
        3.4.3 放线菌粗提物的抑菌活性
    3.5 小结和讨论
第四章 菌株WM-3抗菌活性的研究
    4.1 背景
    4.2 实验材料
    4.3 实验方法
        4.3.1 菌株WM-3菌落形态观察
        4.3.2 菌株WM-3系统发育分析
        4.3.3 菌株WM-3基因组的提取和测序
        4.3.4 菌株WM-3活性物质提取条件的优化
        4.3.5 菌株WM-3粗体物抑菌谱的测定
        4.3.6 菌株WM-3活性物质的纯化
    4.4 实验结果
        4.4.1 菌株WM-3的菌落形态特征
        4.4.2 菌株WM-3系统发育树
        4.4.3 菌株WM-3全基因组注释
        4.4.4 菌株WM-3次级代谢产物基因簇
        4.4.5 菌株WM-3活性物质的提取
        4.4.6 菌株WM-3粗体物的抑菌谱
        4.4.7 菌株WM-3活性物质的纯化
    4.5 小结和讨论
第五章 菌株WF-5抗菌活性的研究
    5.1 背景
    5.2 实验材料
    5.3 实验方法
        5.3.1 菌株WF-5的菌落形态观察
        5.3.2 菌株WF-5的系统发育分析
        5.3.3 菌株WF-5基因组的提取和测序
        5.3.4 菌株WF-5培养基优化
        5.3.5 菌株WF-5的抗真菌活性检测
    5.4 实验结果
        5.4.1 菌株WF-5的菌落形态特征
        5.4.2 菌株WF-5系统发育树
        5.4.3 菌株WF-5全基因组注释
        5.4.4 菌株WF-5次级代谢产物基因簇
        5.4.5 菌株WF-5培养基优化
        5.4.6 菌株WF-5的抗真菌活性
    5.5 小结和讨论
第六章 总结与展望
附录
    附录一 所用试剂和仪器设备
    附录二 固氮微生物16S rRNA序列
    附录三 放线菌16S rRNA序列
参考文献
致谢
攻读硕士期间参与发表的论文
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号:3766940

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